植物硒形态的检测方法

摘要

一种植物硒形态的检测方法，按如下四个步骤进行：一是检测前期的准备，确定检测用的仪器和试剂。二是建立高效液相色谱与电感耦合等离子体质谱即HPLC-ICP-MS联用技术。三是建立五种硒形态标准溶液的色谱图。四是植物样品的预处理及硒形态的提取与检测，用超纯水洗净待测植物材料，冷冻干燥、粉碎过滤和测得含水量，密封放在4℃保存备用；或立即用酶在37℃条件下超声提取30min，离心后取上清液，按照HPLC-ICP-MS联用技术进行硒形态的检测，以采集图谱中所示样品各硒形态对应峰面积计算植物中硒形态的含量。采用本方法检测植物硒形态，形态分离完全，样品前处理简便快捷，流动相成分单一、配制简单，重复性和精确度良好，定量结果准确可靠。

主权项

1.一种植物硒形态的检测方法，其特征是按照如下步骤进行：(1)检测前期的准备：①选用的设备：美国waters公司1525型高效液相色谱仪HPLC，美国Thermo Fisher Scientific公司XSeries2电感耦合等离子体质谱仪ICP-MS，离心机，超声波仪，冻干机；②HPLC与ICP-MS采用0.25mm聚醚醚酮PEEK管连接；③选用的试剂：盐酸为分析纯，柠檬酸为色谱纯，4℃保存的链霉蛋白酶E，以上试剂均采购于上海生物工程有限公司；硒代胱氨酸(SeCys₂)、甲基硒代半胱氨酸(MeSeCys)、硒代蛋氨酸(SeMet)、亚硒酸钠(Na₂SeO₃)和硒酸钠(Na₂SeO₄)，以上五个硒标准品的纯度≥98％，均采购于Sigma公司；④五个硒标准品均用0.1mol/L HC1稀释为100μg/L的混标溶液，4℃保存；试验中所有试剂的配制均采用MΩ为18.2超纯水；(2)建立高效液相色谱与电感耦合等离子体质谱即HPLC-I CP-MS联用技术：①HPLC的操作参数：采用Hamilton PRP-X100、250mm×4.1mm×10μm的阴离子柱为色谱柱，流动相为PH4.72 5m mol/L的柠檬酸，进样量为50μL，流速为1.0mL/min；②ICP-MS的操作参数：采用射频功率为1300W，冷却气流速为13.0L/min，辅助气流速为0.8L/min，雾化气流速为0.85L/min，碰撞反应池为CCT模式，氢氦混合气比例为8∶92，混合气流速为6.95mL/min，测量同位素为⁷⁸Se；(3)建立五种硒形态标准溶液的色谱图：取100μg/L硒混标溶液，采用步骤(2)HPLC-ICP-MS的操作参数进行检测，以保留时间Time/ms为横坐标，响应值Intensity/cps纵坐标，建立五种硒形态标准溶液的色谱图；(4)植物硒形态的提取与检测：①选取植物材料用超纯水洗净，进行冷冻干燥、粉碎、过40目筛，并测出含水量，样品密封放在4℃保存备用；②酶提取法：取样品粉末0.1g放入15mL离心管中，加入20mg链霉蛋白酶E，再加入3mL超纯水后，37℃超声提取30min，14000r/min离心30min，取上清液，过0.22μm滤膜2次，待测；③待测样品按照步骤(2)建立的HPLC-ICP-MS联用技术进行硒形态的检测，以保留时间Time/ms为横坐标，响应值Intensity/cps纵坐标，建立样品硒形态色谱图，以采集图谱中所示样品各硒形态对应峰面积计算硒形态的含量：