一种提高改良的Shewanella oneidensis MR-1遗传转化的方法

摘要

本发明一种提高改良的ShewanellaoneidensisMR-1遗传转化的方法,属于突变或基因工程领域。将纳米二氧化钛颗粒添加到外源基因的供体菌EscherichiacoliWM3064和受体菌S.oneidensisMR-1等比例混合的溶液中，静置培养，能够有效促进该外源基因从供体菌向受体菌的转移，显著提高外源基因对S.oneidensisMR-1中遗传转化效率。该发明还为纳米材料在基因工程领域的新应用提供了试验依据，具有潜在的实际应用价值，符合国家可持续发展战略的要求。

主权项

一种提高改良的Shewanella oneidensis MR‑1遗传转化的方法，其特征在于按照下述步骤进行：一、供体菌体菌的制备：（1） 配置添加了庆大霉素和二氨基庚二酸盐的固体平板酵母膏蛋白胨培养基，对携带抗Gm表达质粒pBBR1MCS‑5的E. coli WM3064进行37 oC下过夜培养活化；（2）挑取（1）中活化菌体所形成的单克隆菌落，接种于添加了庆大霉素和二氨基庚二酸盐的LB液体培养基中，37 oC、200 rpm过夜培养到对数期；取对数期菌液，7000 rpm离心10 min，取沉淀，加pH=7.0的0.01 M PBS将细菌重悬液调成l×109 CFU/ml的密度；二、受体菌S. oneidensis MR‑1的制备：（1）配置固体平板LB培养基，对S. oneidensis MR‑1进行30 oC下过夜培养；（2）将活化的菌体接种于 LB液体培养基中，30 oC、200 rpm过夜培养到对数期，取对数期菌液，7000 rpm离心10 min，取沉淀，加0.01 M PBS（pH=7.0）重悬细胞，并将细菌重悬浮液调成l×109 CFU/ml；三、纳米二氧化钛悬浮液的制备：（1）称取5 nm粒径的纳米二氧化钛，利用无菌超纯水将其制备成0. 5 M悬浮液，并充分涡旋混合；（2）将一定体积的悬浮液放入无菌密封试管中，然后置于超声波仪中超声15 min备用；四、纳二米氧化钛作用于细菌接合转化体系：（1）将供体菌悬浮液和受体菌悬浮液以1:1比例混合，并充分涡旋；（2）按照体积比为1：9分别取纳米二氧化钛悬浮液，加入混合菌液，使最终纳米二氧化钛浓度为0.05 mM，充分涡旋。