具有抗肿瘤活性的金樱子多糖衍生物的制备方法

摘要

本发明公开了一种具有抗肿瘤活性的金樱子多糖衍生物的制备方法，其制备方法是先将金樱子果实粉碎、脱脂、去低聚糖、热水浸提2次后合并提取液、过滤、浓缩、沉淀、干燥后即得金樱子粗多糖，加入DEAE-纤维素52静态吸附30min，再用蒸馏水冲洗DEAE-纤维素52，过滤，收集滤液，得脱色后的金樱子粗多糖。采用酶法与Sevag法结合的方法对粗多糖溶液脱蛋白，采用DEAE-52将金樱子粗多糖进一步分离，收集，透析，冻干得到金樱子多糖，最后对金樱子多糖进行硫酸酯化、羧甲基化、盐酸降解以及对降解产物羧甲基化。得到的几种金樱子多糖衍生物具有体外抗肿瘤特性，可用于抑制卵巢癌、肝癌和直肠癌三种肿瘤细胞的生长。

主权项

具有抗肿瘤活性的金樱子多糖衍生物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）将粉碎后的金樱子果实脱脂、去除低聚糖后采用热水浸提80℃浸提2h后，合并提取液、过滤、浓缩后加入无水乙醇沉淀，再将沉淀干燥后得到金樱子粗多糖；（2）金樱子粗多糖溶于H2O或0.1～0.2mol/LNaCl溶液，加入DEAE‑纤维素52静态吸附30min，冲洗DEAE‑纤维素52，过滤洗脱液，收集滤液即为脱色后的粗多糖溶液；（3）脱色后的粗多糖溶液加入木瓜蛋白酶，45～65℃水浴中降解2～4h，离心取上清液，加入占上清液体积1/5的氯仿‑正丁醇溶液，振荡20 min，分液去除有机相，离心，取上清液，重复步骤（3）操作得到脱蛋白后的粗多糖溶液；（4）脱蛋白后的粗多糖溶液经DEAE‑纤维素52离子交换柱层析，用0.1 ~ 0.5mol/LNaCl 溶液梯度洗脱，平均流速1.0 mL/min，洗脱液用硫酸—苯酚法跟踪检测，收集主峰的洗脱液，将收集到的洗脱液浓缩，再经过DEAE‑Sepharose FF阴离子交换剂，先用pH7.6的缓冲液洗脱，再用0.1~0.5mo1/LNaC1 pH7.6的缓冲液梯度洗脱，平均流速1.0 mL/min，收集主峰的洗脱液，透析，冻干得到金樱子多糖；（5）硫酸酯化多糖衍生物的制备：50mLN,N‑二甲基甲酰胺置于0℃冰浴中；搅拌下缓慢滴加15mL氯磺酸，控制滴加速度，使反应体系温度低于10℃，继续搅拌至得到澄清溶液即为酯化剂；称取金樱子多糖0.5g，加入15mLN,N‑二甲基甲酰胺，4℃冰箱放置过夜，加入酯化剂，50℃摇床反应3h后，冷却，醇沉，离心，将沉淀溶解，再反复醇沉水溶3次，加入0.1mol/L NaOH溶液调节pH至7，浓缩，干燥，得到硫酸酯化多糖衍生物。