抗菌活性物及其制备方法和用途

摘要

本发明公开了一种抗菌活性物的制备方法，所用枯草芽孢杆菌保藏名称为：Bacillussubtilis ZJU15，保藏单位：典型培养物保藏中心，保藏地址：武汉武汉大学；保藏日期：2010年4月8日，保藏号：CCTCC：M2010074；依次包括以下步骤：1)制备发酵液；2)将发酵液离心、加入固体硫酸铵等处理后，得抗菌粗提液；3)将上述抗菌粗提液经Sephadex G-75柱层析，收集具有抗菌活性的峰尖洗脱液，经Mill Q水透析后，冷冻真空干燥，得抗菌活性物。本发明方法制备而得的抗菌活性物用于抑制或消灭单增李斯特菌。

主权项

一种抗菌活性物的制备方法，其特征是，所用枯草芽孢杆菌保藏名称为：Bacillus subtilis ZJUl5，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，保藏地址：中国 武汉 武汉大学；保藏日期：2010年4月2日，保藏号：CCTCC NO：M2010074；依次包括以下步骤：1)、制备发酵液：取Bacillus subtilis ZJUl5 CCTCC NO：M2010074接种于LB培养液中，30℃、200rpm振荡培养12小时，得种子培养液；将上述种子培养液以5％的体积比浓度接种于LB培养液中，在30℃、200rpm振荡培养30小时，获得发酵液；2)、将发酵液以6000～8000rpm离心20min，在所得上清液中按照10.5～11.5g硫酸铵/100ml上清液的投料比加入固体硫酸铵，0℃～4℃下放置10～14小时；然后再以11000～14000rpm离心10～20min，得沉淀；将所得沉淀用灭菌蒸馏水悬浮，所述灭菌蒸馏水的用量是上清液体积的1/20；然后再以11000～14000rpm离心取上清，即得抗菌粗提液；3)、将0.5ml的上述抗菌粗提液经冷冻真空干燥后，重新悬浮于0.3ml洗脱溶液A中，上样进行Superdex 75prep grade柱层析，洗脱溶液A为含0.15M NaCl的20mM磷酸缓冲液pH7.0，流速为1.0mL/min，按照lml/管的格式分管收集洗脱液，以单增李斯特菌为指示菌测定抗菌活性，获得一个活性峰，收集具有抗菌活性的峰尖洗脱液3ml，经Mill Q水4℃透析6次，每次2h，然后冷冻真空干燥，得抗菌活性物。