一种非洲猪瘟病毒核酸扩增引物、检测方法和试剂盒

摘要

本发明涉及一种非洲猪瘟病毒核酸扩增引物、检测方法和试剂盒。所说的引物对和特异性核酸探针选自SEQIDNO：1-12。其检测方法包括步骤：（a）利用PCR引物扩增待测样本中核酸；（b）将烷巯基标记的检测探针标记至纳米金颗粒上；（c）将生物素标记的捕捉探针和步骤（b）纳米金标记的检测探针与变性的PCR产物杂交；（d）将步骤（c）的杂交体系加入包被链亲素的酶标板，捕捉杂交复合物；（e）银染增强捕捉的纳米金；（f）终止银染增强反应，肉眼观察灰度判定结果。本发明具有检测敏感性高、检测特异性强以及检测成本低的特点，可有效排除PCR方法检测非洲猪瘟病毒出现的假阳性或假阴性，快速检测出非洲猪瘟病毒核酸。

主权项

一种用于非洲猪瘟病毒核酸扩增和检测的PCR引物对和特异性核酸探针，其特征在于，所述的PCR引物对和特异性核酸探针选自下列各组：（a）正向引物：5'‑CGTATCTGGACATAAGACGT‑3'，反向引物：5'‑ATGCGTCTGGAAGAGCTGT‑3'；生物素标记的捕捉探针：5'‑生物素‑TTTTTTTTTTGCGCAAGAGGGGGCTGATAG‑3'；巯烷基标记的检测探针：5'‑ATTGCGTCTACTGGGGCGTCTTTTTTTTTT‑O‑(CH2)3‑SH‑3'；（b）正向引物：5’‑ATAAGCTTTCAGGATAGAG‑3’，反向引物：5’‑CATAATCCGTGTCCCAACT‑3’，生物素标记的捕捉探针：5’‑生物素‑TTTTTTTTTTAGGGTATGTAAGAGCTGCAG‑3’；巯烷基标记的检测探针：5’‑GATACCATGAGCAGTTACGGTTTTTTTTTT‑O‑(CH2)3‑SH‑3’；（c）正向引物：5’‑CACGCAGAAATAAGCTTTC‑3’，反向引物：5’‑CGTGTCCCAACTAATATAA ‑3’，生物素标记的捕捉探针：5’‑生物素‑ TTTTTTTTTTGGTATTCCTCCCGTGGCTTC‑3’；巯烷基标记的检测探针：5’‑GCGTCTGGAAGAGCTGTATCTTTTTTTTTT‑O‑(CH2)3‑SH‑3’。