人源化活性煅烧骨的制备方法

摘要

本发明公开了一种人源化活性煅烧骨及其制备方法，其主要成分为羟基磷灰石晶体的天然动物松质骨，具有三维网状多孔结构，粒径为0.1～5mm的颗粒，孔径分布在50～600μm之间，表面复合有人体细胞合成分泌的细胞外基质所形成的涂层。本发明的煅烧骨不仅与人骨结构相似，有利于细胞长入、新骨的形成，有利于移植部位骨结构的重建，而且表面覆有人体细胞所分泌合成的细胞外基质涂层和细胞生长因子，能够与煅烧骨牢固结合、促进体内成骨细胞的贴附生长、加快新骨的形成；同时还具有任意塑型、不会引起免疫排斥反应的优点，可满足临床骨缺损、骨不连的治疗需要。

主权项

一种人源化活性煅烧骨的制备方法，采用去除有机质并经高温煅烧后的天然动物松质骨颗粒，其特征在于，其主要成分为羟基磷灰石晶体，具有三维网状多孔结构，粒径为0.1～5mm的颗粒，孔径大小分布在50～600μm之间；在煅烧骨表面复合有人体细胞合成分泌的细胞外基质所形成的涂层；具体步骤为：步骤一、煅烧骨颗粒处理：将去除有机质并经煅烧后的碎骨块，机械粉碎为粒径0.1～5mm的颗粒，用筛网分选不同大小等级的煅烧骨颗粒；将煅烧骨颗粒置于牛血清、或胶原蛋白、或多聚赖氨酸、或RGD多肽的任一种溶液浸泡不少于1小时；再经干燥后灭菌消毒；步骤二、配制人体细胞培养液：其组分按体积百分比包括：商用最低必需培养液DMEM 67.5％、商用培养液F1222.5％、胎牛血清5～15％，胰岛素1～50ng/ml、氢化可的松10～500ng/ml、腺嘌呤0.02～0.25mM、碱性成纤维细胞生长因子1～10ng/ml、转铁蛋白1～10μg/ml、维生素C 10～50μg/ml；步骤三、细胞接种：将干燥的煅烧骨颗粒按不超过4％的重量比加至人体细胞培养液中静置0.5～2小时后，采用旋转式细胞培养方法进行动态三维培养，每三天换液，培养6～10天后取出煅烧骨颗粒；所述的人体细胞培养液中至少含有105个人体细胞/ml；步骤四、真空干燥：将培养后的煅烧骨颗粒用磷酸盐缓冲液清洗，真空干燥至重量不变化，经灭菌消毒后，即得到复合有人体细胞合成分泌的细胞外基质和细胞生长因子的人源化煅烧骨颗粒。