含有猪细小病毒VP2和生长抑素嵌合蛋白的病毒样颗粒

摘要

本发明涉及基因工程疫苗领域，提供一种含有猪细小病毒VP2和生长抑素嵌合蛋白的病毒样颗粒，由如下方法制备而得：获取目的基因，构建及鉴定重组转移载体pFast-SS4-VP2，构建及鉴定重组穿梭载体rBacmid-SS4-VP2，获得稳定的重组杆状病毒rBac-SS4-VP2，将病毒rBac-SS4-VP2感染sf-9昆虫细胞，获得目的产物。本发明所述病毒样颗粒在制备预防猪感染细小病毒、提高猪生长速度的疫苗的应用。本发明的病毒样颗粒既能预防猪感染细小病毒又能提高猪生长速度；本发明同时提供该病毒样颗粒在制备预防猪感染细小病毒、提高猪生长速度的疫苗中的应用。

主权项

含有猪细小病毒VP2和生长抑素嵌合蛋白的病毒样颗粒，由如下方法制备而得：(1)获取目的基因：以PPV NJ‑1株的DNA为模板，采用正向引物P1和反向引物P2扩增猪细小病毒VP2基因，采用人工合成方法获得两端分别添加了酶切位点的4拷贝的生长抑素的基因序列，所述4拷贝生长抑素的基因序列5’端添加BamH I酶切位点、3’端添加BglII酶切位点，所述4拷贝的生长抑素的基因序列为SS4，如SEQ ID NO：5所示；所述正向引物P1的序列为：5’‑cgggatccagccggctgcaagaacttcttctggaagaccttcacctcctgcactgaattgtctgca‑3’，所述反向引物P2的序列为：5’‑cgcctcgagctagtataattttcttggtat‑3’；(2)构建及鉴定重组转移载体pFast‑SS4‑VP2；该重组转移载体的构建及鉴定方法如下：将VP2基因克隆至转移载体pFastBac HTA中，经酶切，测序，鉴定阳性质粒命名为pFast‑VP2；该质粒pFast‑VP2经酶切、去磷酸化后与SS4连接，再经酶切，测序，鉴定为阳性的质粒为重组转移载体pFast‑SS4‑VP2；(3)构建及鉴定重组穿梭载体rBacmid‑SS4‑VP2；该重组穿梭载体的构建与鉴定方法为：将重组载体pFast‑SS4‑VP2转化进含穿梭质粒Bacmid的感受态细胞DH10Bac中，经蓝白菌落筛选和PCR鉴定为阳性的质粒即为重组穿梭载体rBacmid‑SS4‑VP2；所述PCR鉴定中采用杆状病毒通用引物，上游引物为GTTTTCCCAGTCACGAC，下游引物为CAGGAAACAGCTATGAC；(4)获得稳定的重组杆状病毒rBac‑SS4‑VP2；该重组杆状病毒的获得方法为：重组穿梭载体rBacmid‑SS4‑VP2转染sf‑9昆虫细胞，进行重组杆状病毒的扩增，提取扩增后的重组杆状病毒的基因组DNA，经PCR鉴定为阳性者即为稳定的重组杆状病毒rBac‑SS4‑VP2；所述PCR鉴定中的引物为步骤(1)中的正向引物P1和反向引物P2；(5)将所述的病毒rBac‑SS4‑VP2感染sf‑9昆虫细胞，获得含有猪细小病毒VP2和生长抑素嵌合蛋白的病毒样颗粒。