采用反转录环介导等温扩增技术检测苹果病毒的方法

摘要

本发明涉及采用反转录环介导等温扩增技术检测苹果病毒的方法，其中该方法包括苹果病毒总RNA提取，RT-LAMP反应和电泳检测，确定病毒种类，其中所述苹果病毒选自苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)和苹果茎痘病毒(ASPV)。本发明根据苹果病毒的基因保守区设计了RT-LAMP引物，采用一步法反转录环介导等温扩增技术建立了一种快速、灵敏、高度特异的检测苹果多种主要病毒的方法。为苹果病毒的快速检测提供了新的手段。

主权项

一种采用反转录环介导等温扩增技术检测多种苹果病毒的方法，其中该方法包括苹果病毒总RNA提取，RT‑LAMP反应和电泳检测，确定病毒种类，其中所述苹果病毒选自苹果茎沟病毒(ASGV)、苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)和苹果茎痘病毒(ASPV)，所述RT‑LAMP反应采用的引物包含选自如下3组之一的引物组：第1组引物，用于ASGV病毒的RT‑LAMP反应：外引物(F3和B3)：SEQ ID NO.1：5’‑CAAGAAATGGCCCAAAGC‑3’；SEQ ID NO.2：5’‑CTAACCCTCCAGTTCCAG‑3’；内引物(FIP和BIP)：SEQ ID NO.3：5’‑AGGTGTTAGACGATTCATTTTGAGATTCGAAAAAAGCCCGTGG‑3’；SEQ ID NO.4：5’‑ACAGGTGATTGATAGGATGACCAAATTACTCTCTGAACCTGCC‑3’；第2组引物，用于ACLSV病毒的RT‑LAMP反应：外引物(F3和B3)：SEQ ID NO.5：5’‑ACTACCCCAGTCTCAACA‑3’；SEQ ID NO.6：5’‑CCAGAGTTTTGCAACCAG‑3’；内引物(FIP和BIP)：SEQ ID NO.7：5’‑AGGTTTTCCACCTTCTTCTCCTGTTATAAGTGGATTCCAATATGAAC‑3’；SEQ ID NO.8：5’‑TTACCTACCAGAGAAAACTAGGGAAGAGTGATTAACATAAGCGAATG‑3’；第3组引物，用于ASPV病毒的RT‑LAMP反应：外引物(F3和B3)：SEQ ID NO.9：5’‑TGCGGTGAATCAGGTGAATG‑3’；SEQ ID NO.10：5’‑TGCAACCCCAACTGCTCTA‑3’；内引物(FIP和BIP)：SEQ ID NO.11：5’‑GTTGGAGGCAGCACTTCTTGGACGTAGTGGTGGTGGAACAC‑3’；SEQ ID NO.12：5’‑GAGACGCCTAGATTCTGTGGGCCGGTTGCTTGCGACAACT‑3’。