长链扣手探针的生物合成方法

摘要

本发明公开了长链扣手探针的生物合成方法。该生物合成的基本方法是：首先根据设计的扣手探针序列，应用PCR法合成扣手探针前体。扣手探针前体的5’端带有双链DNA限制性内切酶识别序列，而扣手探针前体的3’端带有双链DNA单链切刻酶的识别序列。然后将该前体连接到用于纯化扣手探针的专用载体pOCP中，转化大肠杆菌并繁殖该质粒，质粒经过酶切、聚丙烯酰胺凝胶电泳、回收、纯化、冻干脱水等步骤，最后得到高质量的长链扣手探针。

主权项

一种长链扣手探针的生物合成方法，包括如下步骤：A、在扣手探针主体片段两端分别添加与待测基因5’端互补的DNA片段1和与待测基因3’端互补的DNA片段2，得到探针前体；所述DNA片段1的5′末端含有双链DNA限制性内切酶MlyI识别位点，所述DNA片段2的3′末端含有双链DNA单链切刻酶Nb.Bts I识别位点；所述扣手探针主体片段为如下I或II：I的核苷酸序列为序列表中序列1自5’末端第24‑125位寡核苷酸；II的核苷酸序列为序列表中序列2自5’末端第24‑125位寡核苷酸；B、将步骤A)得到的探针前体插入pOCP载体的多克隆位点间，得到重组载体；C、用双链DNA限制性内切酶MlyI和双链DNA单链切刻酶Nb.Bts I酶切步骤B)得到的重组载体，即得到扣手探针。