一种牛传染性鼻气管炎病毒的检测方法及应用

摘要

本发明公开了一种牛传染性鼻气管炎病毒的检测方法，采用在PCR反应体系中加入指示假阴性的扩增内标，通过碱基重排、引物设计和搭桥法PCR扩增，构建了一条IAC片段，通过碱基重排和搭桥法PCR扩增，内标模板添加浓度为每个反应102拷贝，Mg2+2.0mmol/L，dNTP各0.3mmol/L，引物各0.5mmol/L，探针各0.2mmol/L，扩增条件为50℃，2min，1个循环；95℃，5min，1个循环；95℃15s，60℃60s，45个循环，能够准确显示抑制成分的存在或指示假阴性的发生。该方法灵敏度比常规PCR和病毒分离高10～100倍。该方法广泛应用于检测牛传染性鼻气管炎病毒领域。

主权项

一种内标荧光PCR试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒具有以下特征：(1)BHV‑1检测引物和探针：上游引物(Ip2)：GCT CGC GGA GCT GGA G；下游引物(Ir2)：CGC TGT ATC TCG CTG TAG TC；目标模板检测探针(Itpro)：FAM‑CAG CAC CTT TGT GGA CCT AAA CCT CAC G‑ECLIPSE；内标模板检测探针(Icpro)：HEX‑TCC ACC CTT GCA ATC CTC GTC GTC TAG A‑ECLIPS；(2)共扩增内标模板：所述的共扩增内标模板与GeneBank登录号为AJ004801.1，长度为787bp的BHV‑1 gB基因序列具有相同的碱基数和变性、退火温度，并能在同一反应体系中共同进行荧光PCR扩增，所述共扩增内标模板的序列如Sequence 2所示。