一种堆肥发酵液提高黑麦草抗Cr和Cd能力的方法

摘要

本发明公开了一种堆肥发酵液提高黑麦草抗Cr和Cd能力的方法，它是在直径为7cm的一次性塑料杯中加入200g烘干土壤，并播种黑麦草种子0.5g，待播种10d后，分别向草坪植物上加入菌剂，加菌剂生长5d后，向土壤中分别加入氯化镉和重铬酸钾溶液，实验为3次重复，共60个样品，室内适温继续培养，实验期间每天定量给水，保证各个处理间环境一致，待其生长30天后测定各项指标。实验结果表明：加入苏云金芽孢杆菌菌剂后，可促进草坪植物的生长，提高了黑麦草对Cr和Cd抗性能力。

主权项

一种堆肥发酵液提高黑麦草抗Cr和Cd能力的方法，其特征在于按如下的步骤进行：(1)苏云金芽孢杆菌的分离：1）将新鲜堆肥样品称取10g，放入加有20粒玻璃珠的90ml无菌水三角瓶中，振荡，使样品中的微生物充分且均匀分布于液体中，用移液枪在三角瓶中取lml母液，加入盛有9ml无菌水的大试管中充分混匀，此为l0‑1浓度的稀释溶液，按此方法分别稀释成l0‑2、l0‑3、l0‑4、l0‑5、l0‑6几种浓度的堆肥稀释液；分别用移液枪吸取0.1毫升浓度为l0‑2、l0‑3、l0‑4、l0‑5、l0‑6稀释液，注入到牛肉膏蛋白胨固体平板培养基上，每一稀释度重复三次，无菌水为空白对照；用无菌玻璃刮刀将菌悬液均匀涂抹在整牛肉膏蛋白胨固体培养基上，使微生物均匀分布，将含有牛肉膏蛋白胨固体培养基的平板倒置于37℃恒温培养箱中培养1天；2）苏云金芽孢杆菌发酵液的制备：A.将分离出的苏云金芽孢杆菌菌种纯化培养2代；然后接入装有50mL牛肉膏蛋白胨液体培养基的250 mL三角瓶中，180 r/min37℃培养，选用600nm波长进行比浊测定，以菌悬液的OD值为纵坐标，培养时间为横坐标，绘制微生物的生长曲线，根据生长曲线获得苏云金芽孢杆菌生长至稳定期的时间；B.取纯化苏云金芽孢杆菌菌种，接入装有50mL高氏一号液体培养基的250 mL三角瓶中，180 r/min37℃培养8～12 h至稳定期，取稳定期的菌种采用显微镜直接计数法计算每mL菌液中的活菌数，将稳定期的菌液进行抽滤，抽滤后将菌液通过孔径为0.22um的微孔滤膜，获得的过滤液则为微生物发酵后的过滤液；3）稀释苏云金芽孢杆菌发酵液：取一部分过滤液分别稀释至4倍滤液和8倍滤液，备用；4）堆肥发酵液提高黑麦草对Cr和Cd抗性能力的方法：在直径为7cm的一次性塑料杯中加入200g烘干土壤，并播种黑麦草种子0.5g，待播种10d后，分别向草坪植物上加入1ml堆肥发酵液，对照组加入无菌液体培养基，加菌剂生长5d后，向土壤中分别加入氯化镉和重铬酸钾溶液，实验为3次重复，共60个样品，室内适温继续培养，实验期间每天定量给水，保证各个处理间环境一致，待其生长30天后测定各项指标；其中的纯化培养2代培养指的是：用接菌环直接挑起待纯化的菌落，接种到事先准备好的高氏一号平板固体培养基中，在平板上自左向右轻轻划线，将培养皿倒置于37℃恒温培养箱中培养1天，此过程为纯化一代，从纯化一代的菌种中挑取菌落再重复此过程为纯化二代。