发明名称 |
使用量子点改进聚合酶链式反应的方法 |
摘要 |
本发明公开了一种使用量子点改进聚合酶链式反应反应的方法,其步骤是:A、量子点的准备:量子点为水溶性;B、PCR体系的优化:将量子点加入PCR反应体系中进行PCR扩增;C、PCR产物的检测:对扩增后的DNA样品进行琼脂糖凝胶电泳,与对照体系进行比较;D、量子点从反应体系中的分离并回收扩增得到的PCR产物:对反应结束体系进行离心,量子点被离心到底部,取上清得到所需PCR产物。本发明方法简便,操作方便,有效地提高了聚合酶链式反应的专一性和产率,消除了非特异性的扩增和假阳性扩增,增加了聚合酶链式反应的专一性,广泛应用于分子诊断、分子标记、法医鉴定、基因克隆等分子生物学的各个领域。 |
申请公布号 |
CN101372704B |
申请公布日期 |
2012.07.25 |
申请号 |
CN200810048422.0 |
申请日期 |
2008.07.17 |
申请人 |
武汉大学 |
发明人 |
李立家;马璐;何世斌 |
分类号 |
C12P19/34(2006.01)I;C12Q1/68(2006.01)I |
主分类号 |
C12P19/34(2006.01)I |
代理机构 |
武汉宇晨专利事务所 42001 |
代理人 |
王敏锋 |
主权项 |
一种使用量子点改进聚合酶链式反应的方法,其步骤是:A、量子点的准备:量子点为水溶性,粒径大小为6‑50nm,所述量子点为半导体纳米微颗粒;所述量子点为武汉珈源量子点技术开发有限公司的产品型号为W‑3001‑1的水溶性量子点或Invitrogen公司的产品型号为Q10141MP的水溶性量子点;B、聚合酶链式反应体系的优化:将20‑30nM的量子点加入PCR反应体系当中进行PCR扩增;设定如下:首先模板94℃变性4分钟;接着25‑35个循环,每个循环包括:94℃变性30秒,25‑65℃退火30秒到1分钟,72℃延伸30秒到15分钟,循环次数、退火温度25‑65℃、退火时间30秒到1分钟、延伸时间30秒到15分钟,根据待扩增对象的长度和引物P1、P2、P3、P4不同;最后72℃延伸10分钟;C、PCR产物的检测:对扩增后的DNA样品进行琼脂糖凝胶电泳,检查扩增条带,与对照体系进行比较;D、量子点从反应体系中分离并回收扩增得到的PCR产物:对反应结束体系进行离心,量子点被离心到底部,取上清得到所需PCR产物;所述的模板为:玉米基因组DNA;所述的引物为P1:5’‑GTGCGATCATACCAGCRYTAATGAACCGG‑3’;所述的引物为P2:5’‑GAGGTGCAACACGAGGACTTCCCAGGAGG‑3’;所述的引物为P3:5’‑GGCCTTCAGAGACGAGGTTG‑3’;所述的引物为P4:5’‑GCTGTGCATCAGGAATAATTTG‑3’。 |
地址 |
430072 湖北省武汉市武昌珞珈山 |