反转录PCR分析IVF单个植入前胚胎的基因表达中的反转录产物PCR体系

摘要

本发明提出一种反转录PCR分析IVF单个植入前胚胎的基因表达中的反转录产物PCR体系。所述分析基因表达方法包括步骤：标本收集及纯化；反转录反应；反转录阴性对照和阳性对照；反转录产物进行实时定量PCR检测；使用组织细胞RNA进行优化PCR条件；在该条件下同时放大扩增阴性对照和阳性对照；采用相对定量的方法检测目的基因的表达量；以及进行统计学分析。本发明还提供了反转录产物进行实时定量PCR检测的PCR体系。这种改良的实时定量反转录PCR技术非常敏感，高度精确，同时能产生可观的资料。利用这种方法，可以弥补Microarray的不足，对分析单个关键基因在单个细胞的表达和在IVF科研与临床上有非常广泛的应用价值。此方法为确定新的IVF和体外胚胎培养培养液的条件提供了一个重要的监测手段。

主权项

一种反转录PCR分析IVF单个植入前胚胎的基因表达中的反转录产物PCR体系，所述分析基因表达方法包括步骤：标本收集及纯化；反转录反应；反转录阴性对照和阳性对照；反转录产物进行实时定量PCR检测；使用组织细胞RNA进行优化PCR条件；在该条件下同时放大扩增阴性对照和阳性对照；采用相对定量的方法检测目的基因的表达量；以及进行统计学分析；其中在反转录产物进行实时定量PCR检测步骤中，反转录产物进行实时定量PCR反应体系如下：模板(cDNA)2μl，Taq DNApolymerase 0.75IU，引物1μM，dNTPs 0.5μM，DMSO 0.05μl，Mg++2mM，荧光染料SYBR green 0.1μl，10x PCR缓冲液1μl，加MilliQ超纯水至终体积10μl。