一种真菌分子生物学鉴定的DNA模板简易制备及PCR扩增方法

摘要

本发明属于环境生物技术领域，具体涉及一种可以用于大规模真菌菌株鉴定的、不需要提取真菌DNA的PCR模板简易制备及PCR扩增方法。本发明所用的真菌DNA简易制备方法是利用PCR扩增仪加热破碎含有少量菌丝体的及少量TE缓冲液的PCR管，获得少量的真菌DNA，结合改良的PCR扩增体系扩增获得所真菌鉴定所需要的真菌DNA片段。该步骤少、低成本、操作简单、扩增效果良好且环境友好，适用于大规模的真菌分子生物学鉴定。

主权项

一种真菌分子生物学鉴定的DNA模板简易制备及PCR扩增方法，其特征是由以下步骤组成：1）用无菌镊子或接种环，在超净工作台上取一环大小的真菌菌丝体，放入到0.2 mL的PCR管中；2）加入2‑5倍于菌丝体积的1×TE buffer，盖紧管盖后，放入PCR扩增仪，98 ℃ 加热8‑10 min；1×TE buffer组成为：100 mmol L‑1 Tris‑HCl, 10 mmol L‑1 EDTA, pH 8.0；3）取上清即为简易制备的真菌DNA，用作为PCR反应的模板；4）以改良的PCR反应体系进行扩增反应，50 μL PCR 反应体系包括：10×PCR buffer 5 μL，MgCl2 20 mmol L‑1 6 μL，dNTPs 10 mmol L‑1 1 μL，每种引物 10 μmol L‑1 2 μL，Taq DNA polymerase 5 U μL‑1 0.6 μL，上述简易真菌DNA 1 μL；使用较高浓度的Taq酶的激活剂Mg2+及较高浓度的Taq酶增强PCR反应体系的扩增能力。