一种鱼红细胞氧化应激模型的建立方法

摘要

本发明公开了一种鱼红细胞氧化应激模型建立方法，将鲤鱼尾部消毒，从每尾鱼尾部抽取约1毫升血液。将血液放入6毫升含肝素钠的鲤鱼生理盐水中，血样在900g，4℃下离心10分钟，弃去上清液。红细胞沉淀悬浮在6毫升鲤鱼生理盐水中，然后在900g，4℃下离心10分钟。用鲤鱼生理盐水重新悬浮红细胞沉淀，洗涤2次后，细胞沉淀悬浮在6毫升鲤鱼生理盐水中，4℃保存备用。取适量的红细胞悬液，加入等体积的Fe2+/H2O2混合溶液，其终浓度为40μM/20μM，37℃孵育8-10小时。样品在1000g，4℃条件下离心3分钟，细胞样用流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳测定凋亡情况。本发明首次使用Fe2+/H2O2混合溶液为自由基·OH的来源，建立红细胞氧化应激模型。

主权项

一种鱼红细胞氧化应激模型建立的方法，其特征在于，依次包括以下步骤：A1、按常规方法将体重相近的3尾鲤鱼尾部消毒，用注射器从每尾鱼尾部抽取约1毫升血液；A2、将血液放入6毫升含肝素钠40IU/ml的鲤鱼生理盐水中，血样在900g，4℃下离心10分钟，弃去上清液；A3、红细胞沉淀悬浮在6毫升鲤鱼生理盐水中，然后在900g，4℃下离心10分钟；A4、用鲤鱼生理盐水重新悬浮红细胞沉淀，按步骤A3洗涤2次后，细胞沉淀悬浮在6毫升鲤鱼生理盐水中，4℃保存备用；A5、取适量的红细胞悬液，加入等体积的Fe2+/H2O2混合溶液，其终浓度为40μM/20μM，37℃孵育8‑10小时；A6、样品在1000g，4℃条件下离心3分钟，细胞样用流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳测定凋亡情况。