两种海洋动物抗菌肽基因的融合表达产物及其制备方法

摘要

两种海洋动物抗菌肽基因的融合表达产物及其制备方法。涉及生物技术领域中鱼类与蟹类的基因工程，提供两种海洋动物抗菌肽基因的融合表达产物及其制备方法。融合表达产物的基因包括锯缘青蟹抗菌肽scygonadin2基因、连接肽和大黄鱼抗菌肽hepcidin基因。制备方法包括：克隆融合基因scygonadin2-hepcidin；表达融合基因scygonadin2-hepcidin，即得两种海洋动物抗菌肽基因的融合表达产物。利用pET28a原核表达载体，成功高效的表达出具有抗菌活性的锯缘青蟹抗菌肽scygonadin2与大黄鱼抗菌肽hepcidin的融合表达产物，使得串联抗菌肽的药用价值得到开发。

主权项

两种海洋动物抗菌肽基因的融合表达产物，其特征在于，所述两种海洋动物抗菌肽基因的融合表达产物的基因包括锯缘青蟹抗菌肽scygonadin2基因、连接肽和大黄鱼抗菌肽hepcidin基因；所述锯缘青蟹抗菌肽scygonadin2的基因序列为：cacccatggc gaatggcctg gcactcaaca gacttatgaa taaggccgtc gacgccatag    60tttatatggt tggacaacaa gacgcaggcg tctctcttct gggtcaccca tgtctggtgg    120agtcagcgaa acaaccggaa ggcatctaca ccgcagtaat gtcgtgtgct tcctggaccc    180ctcgcttcgt tggggaaggc acaagcgagg ttgaacttga ggcgcttaaa ggttcgatca    240gaagctttat ccgtaaggca tccgattacc agctgttaag taaagaagac ctcgaggact    300ggcttgcttc ctacggttct ccaggttccg gt                                  332其中第1～3位的碱基序列cac为保护碱基，第4～9位碱基序列ccatgg为酶切位点，第315～332位的碱基序列ggttct ccaggttccg gt为连接肽；所述大黄鱼抗菌肽hepcidin的基因序列为：ggttctccag gttccggtgt cccagccaat gaagagcaag agctggagca gcaaatttat    60tttgctgatc cagagatgcc agtggaatca tgcaagatgc cgtattacat gcgtgagaat    120cgtcagggca gccctgctag atgcaggttt tgctgccgtt gctgtcctag aatgagggga    180tgtggtatct gctgcaggtt c ctcgagcgg                                    210其中第1～18位的碱基序列ggttct ccaggttccg gt为连接肽，第202～207位的碱基序列ctcgag为XhoI酶切位点，第208～210位的碱基序列cgg为保护碱基；所述连接肽的氨基酸序列为：Gly Ser Pro Gly Ser Gly1               5；所述两种海洋动物抗菌肽基因的融合表达产物的氨基酸序列为：Met Ala Asn Gly Leu Ala Leu Asn Arg Leu Met Asn Lys Ala Val Asp1               5                   10                  15Ala Val Tyr Met Val Gly Gln Gln Asp Ala Gly Val Ser Leu Leu Gly            20                  25                  30His Pro Cys Leu Val Glu Ser Ala Lys Gln Pro Glu Gly Ile Tyr Thr        35                  40                  45Ala Val Met Ser Cys Ala Ser Trp Thr Pro Arg Phe Val Gly Glu Gly    50                  55                  60Thr Ser Glu Val Glu Leu Glu Ala Leu Lys Gly Ser Ile Arg Ser Phe65                  70                  75                  80Ile Arg Lys Ala Ser Asp Tyr Gln Leu Leu Ser Lys Glu Asp Leu Glu                85                  90                  95Asp Trp Leu Ala Ser Tyr Gly Ser Pro Gly Ser Gly Val Pro Ala Asn            100                 105                 110Glu Glu Gln Glu Leu Glu Gln Gln Ile Tyr Phe Ala Asp Pro Glu Met        115                 120                 125Pro Val Glu Ser Cys Lys Met Pro Tyr Tyr Met Arg Glu Asn Arg Gln    130                 135                 140Gly Ser Pro Ala Arg Cys Arg Phe Cys Cys Arg Cys Cys Pro Arg Met145                 150                 155                 160Arg Gly Cys Gly Ile Cys Cys Arg Phe Leu His His His His His His                165                 170                 175其中103～108位氨基酸序列为连接肽。