一种猪瘟病毒重组E2蛋白及其IgM抗体ELISA检测试剂盒

摘要

本发明属于分子生物学领域，涉及一种猪瘟病毒重组E2蛋白及其IgM抗体ELISA检测试剂盒。一种重组大肠杆菌表达的猪瘟病毒E2蛋白，该蛋白系将E2蛋白主要抗原区域克隆入原核表达载体得到重组表达载体，将该重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)，经重组大肠杆菌表达纯化后获得，Westernblot试验证明该蛋白具有良好的抗原性。将该蛋白包被酶标板，通过抗原包被浓度、血清稀释度和作用时间、二抗浓度和作用时间以及显色时间的优化建立ELISA方法，检测阴性血清确定临界值和判定标准。本发明构建的重组菌株对外源蛋白表达稳定，抗原性好；在此基础上首次用于建立CSFVIgM抗体ELISA检测试剂盒。

主权项

一种重组大肠杆菌表达的猪瘟病毒E2蛋白，该蛋白系将包含E2主要抗原区的基因片段克隆入原核表达载体pET‑32a得到重组表达载体，将该重组表达载体转化大肠杆菌BL21(DE3)获得重组大肠杆菌BL21(DE3)，将该重组大肠杆菌BL21(DE3)培养至OD600达0.6‑0.8时加入终浓度为0.5mM的IPTG进行诱导表达，分离菌体经Ni亲和层析柱纯化获得。