一种区分欧洲型或亚洲型舞毒蛾的方法

摘要

本发明涉及一种区分欧洲型或亚洲型舞毒蛾的方法，设计了引物对和探针序列，以所述样品总DNA为DNA模板，实时荧光定量PCR完成时，ABI7500实时荧光定量PCR仪显示样品检测结果为AlleleY值时，表明样品406位点碱基为G，即该样品为亚洲型舞毒蛾；当样品检测结果显示为AlleleX值时，表明样品406位点碱基为A，即样品为欧洲型舞毒蛾。检测快速，准确地鉴定欧洲型和亚洲型舞毒蛾，适用于口岸对进口木材的检测。

主权项

一种区分欧洲型或亚洲型舞毒蛾的方法：（1）提取样品总DNA；（2）以所述样品总DNA为DNA模板，以F和R为引物，MGB1和MGB2为探针，在ABI7500实时荧光定量PCR仪中进行实时荧光定量PCR；以AG序列为亚洲型阳性对照中的DNA模板，以OG序列为欧洲型阳性对照中的DNA模板；阴性对照中以ddH2O替代DNA模板；所述引物F的序列为：GGATGAACTGTTTACCCTCCTCTATCT；所述引物R的序列为：TTGATGAAATACCAGCTAAGTGAAGAGAAAA；所述探针MGB1的序列为：ACAGATCTACCTCTATGAGCA；所述探针MGB2的序列为：  AGATCTACCTCCATGAGCA；所述探针MGB1以绿色荧光蛋白作为荧光报告基团， 所述探针MGB2以羧基荧光素作为荧光报告基团；所述AG序列为：ggatgaactgtttaccctcctctatcttctaatattgctcatggaggtagatctgttgatttagctattttttctcttcacttagctggtatttcatcaa；所述OG序列为：ggatgaactgtttaccctcctctatcttctaatattgctcatagaggtagatctgttgatttagctattttttctcttcacttagctggtatttcatcaa；（3）结果分析：实时荧光定量PCR完成时，ABI7500实时荧光定量PCR仪显示样品检测结果为Allele Y值时，表明样品406位点碱基为G，即该样品为亚洲型舞毒蛾；当样品检测结果显示为Allele X 值时，表明样品406位点碱基为A，即样品为欧洲型舞毒蛾。