猪流感病毒H3N2和H1N1亚型HA1蛋白重组猪痘病毒及其制备方法

摘要

本发明属于生物技术领域，公开了猪流感病毒H3N2和H1N1亚型HA1蛋白重组猪痘病毒及其制备方法。根据猪流感病毒H3N2毒株和H1N1毒株的HA1基因序列、口蹄疫病毒的2A基因序列，设计、合成H3-2A-H1基因，并把该基因克隆入猪痘病毒载体pUSZ11中，得到转移载体pUSZ11/H3-2A-H1。将猪痘病毒和转移载体pUSZ11/H3-2A-H1感染、转染PK15细胞，进行同源重组获得重组猪痘病毒。该重组猪痘病毒能稳定表达猪流感病毒H3N2和H1N1的HA1蛋白，能有效地刺激机体的免疫保护反应，可在制备预防和/或治疗猪流感病毒H3N2和H1N1亚型感染的药物中应用。

主权项

一种猪流感病毒H3N2和H1N1亚型HA1基因的转移载体pUSZ11/H3‑2A‑H1，其特征在于该转移载体是将序列为SEQ ID NO.1所示的由猪流感病毒H3N2毒株HA1基因序列、口蹄疫病毒的2A基因序列和猪流感病毒H1N1毒株HA1基因序列串联组成的H3‑2A‑H1基因插入猪痘病毒载体pUSZ11的BamH I酶切位点所得；其中，所述的猪痘病毒载体pUSZ11通过如下方法构建：以野生型猪痘病毒wtSPV基因组DNA为模板，以一对引物SEQ ID NO.2和SEQ ID NO.3进行PCR，然后用EcoR I和Kpn I酶切扩增产物，把SEQ ID NO.4所示的LF克隆到pUC19中；以wtSPV基因组DNA为模板，用引物SEQ ID NO.5和SEQ ID NO.6进行PCR，然后用Sal I和Hind III酶切扩增产物把SEQ ID NO.7所示的RF克隆进上述的pUC19中，形成pUS01质粒；以pSP1质粒为模板，用引物对P11ZS：SEQ ID NO.8和P11ZX：SEQ ID NO.9，把LacZ基因克隆到载体pUS01的BamH I和Sal I位点间，其余序列为pUC19框架序列，由此形成猪痘病毒载体pUSZ11。