利用干燥剂提高生物大分子结晶条件筛选成功率的方法

摘要

本发明公开了一种利用干燥剂提高生物大分子结晶条件筛选成功率的方法，首先用缓冲液溶解生物大分子，使生物大分子的终浓度达到2～40mg/ml；使用结晶筛选试剂与生物大分子溶液混合构建生物大分子结晶筛选溶液体系；使用干燥剂代替通常气相扩散法使用的池液，用于浓缩生物大分子结晶液滴，实现生物大分子的结晶。由于在气相扩散法中采用干燥剂代替池液进行浓缩结晶液滴的方式，可使蛋白质结晶条件筛选成功率由传统方法的4～10％提高至20～50％。同时，由于不再使用池液，以池液体积150微升计算，筛选试剂消耗成本大幅下降至原成本的百分之一以下。

主权项

一种利用干燥剂提高生物大分子结晶条件筛选成功率的方法，其特征在于包括以下步骤：(a)用HEPES‑Na缓冲液或者氨水溶解生物大分子，使生物大分子的终浓度达到2～40mg/ml；(b)用Crystal Screen试剂盒的50种结晶缓冲液对生物大分子溶液混合构建生物大分子结晶筛选溶液体系结晶条件进行筛选；(c)使用坐滴板，在每深孔中加入干燥剂，使用自动移液系统将1μl筛选结晶剂和1μl生物大分子溶液混合为结晶液滴，滴在小坐滴孔中，密封结晶板；(d)将结晶板放入控温箱，恒温20℃，放置4天后，在显微镜下观察，统计出获得生物大分子的条件数目；所述生物大分子是溶菌酶、过氧化氢酶、核糖核酸酶A或胰岛素。