鹿血清的提纯方法

摘要

本发明提供了一种鹿血清的提纯方法，它是采用葡聚糖凝胶SephadexG-25过滤处理的方法，包括把鹿血清加入葡聚糖凝胶Sephadex G-25色谱柱内，用0.9％NaCl洗脱剂洗脱，用双缩脲试剂检测收集流出液样品等步骤。该方法简便、重复性好，工艺稳定可靠，尿素清除率可以达到76％以上，蛋白得率达到90％以上。

主权项

一种鹿血清的提纯方法，它包括以下几个步骤：a.处理凝胶：将葡聚糖凝胶Sephadex G‑25用蒸馏水充分膨胀后备用；b.装柱：用脱脂棉花堵在色谱柱的下端，将处理好的凝胶一次性缓慢倒入色谱柱中，打开色谱柱的活塞，让凝胶自由沉降，同时用蒸馏水洗脱，凝胶沉降完毕，待水面高度下降至与凝胶表面基本一致时，关闭色谱柱活塞，准备加样；c.加样：用移液枪吸取鹿血清，沿色谱柱环周壁加入，打开色谱柱活塞，待鹿血清高度下降至与凝胶表面基本一致时，关闭色谱柱活塞，准备洗脱；d.洗脱：用吸管吸取配置好的0.9％NaCl洗脱剂溶液，控制流速为0.18～0.4ml/min，沿色谱柱环周壁加入，打开色谱柱活塞收集流出液；e.检测：用双缩脲试剂检测收集流出液样品，样品中加入双缩脲试剂呈紫色，表明有蛋白洗脱下来，继续收集流出液，样品中加入双缩脲试剂呈无色，表明没有蛋白洗脱下来，停止收集；步骤e使用的双缩脲试剂的配制方法是：首先，称定240.0g氢氧化钠NaOH，加蒸馏水定容至1000ml，即得6mol/L氢氧化钠NaOH；然后，称定2～4g五水硫酸铜CuSO4·5H2O，8～10g酒石酸钾钠NaKC4H4O6·4H2O，8～10g氯化钠NaCl，4～6g碘化钾KI，5～7mo l/L氢氧化钠NaOH 80～120ml，加蒸馏水定容至1000ml，制得双缩脲试剂。