一种江蓠属养殖龙须菜的深加工方法

摘要

本发明涉及一套经济可行的海域大型养殖海藻——龙须菜的深加工方法，可同时得到高品质琼脂、试剂纯藻红蛋白、卤素过氧化物酶产品及微量元素饲料添加剂和微量元素肥料。具体操作过程为龙须菜藻体经预处理、粗提液制备、硫酸铵分级沉淀即得蛋白粗提液，经阴离子交换柱层析即可得到电泳纯卤素过氧化物酶产品和藻红蛋白粗溶液；该粗溶液经羟基磷灰石及分子筛柱层析对藻红蛋白进行纯化即得到藻红蛋白纯品；蛋白浸提后剩余的龙须菜残渣提取高品质琼脂；琼脂提取后的残渣干燥，粉碎，得微量元素饲料添加剂和微量元素肥料。本发明工艺经济、高效、绿色环境友好，为大量养殖龙须菜的产品出路开辟了新路径，成为实现龙须菜综合利用产业化的重要技术基础。

主权项

一种江蓠属养殖龙须菜的深加工方法，其特征在于：以中国海域养殖江蓠属龙须菜为原料，A. 提取试剂纯藻红蛋白(1)预处理：清洗去杂，冷冻干燥，液氮研磨成龙须菜粉末；(2)粗提液制备：于龙须菜粉末中加入龙须菜藻体干重10～30倍的0.01～0.2M的磷酸盐缓冲液，0～4℃，浸泡24～72h，纱布过滤得藻渣和滤液；滤液于0～4℃，3000g～8000g离心10～50min，上清液即蛋白粗提液；(3)硫酸铵分级沉淀：粗提液加固体硫酸铵使硫酸铵于粗提液中的质量浓度为15～40％，0～4℃，6000～15000g离心10～50min；弃沉淀，上清再次加固体硫酸铵使硫酸铵于溶液中的质量浓度为55～80％，0～4℃，6000～15000g离心10～50min；收集沉淀，离心取沉淀物，用0.01～0.2M磷酸缓冲液透析10～48小时，得到蛋白溶液A；透析膜截留分子量为14000；(4)阴离子交换柱层析分离：用含NaCl的0.01～0.2M磷酸缓冲液线性梯度洗脱蛋白溶液A，洗脱时NaCl于磷酸缓冲液中的浓度从0.05～2.0M线性变化，蛋白溶液A与洗脱液的总体积比为1:20～40，洗脱组份按时间间隔收集，每3～10分钟收集一管，分别测定每管收集液于280nm和565nm处的吸光值，根据洗脱峰和OD565/OD280比值大小，收集比值≥1的较纯收集管内的蛋白溶液B；(5)羟基磷灰石柱层析分离：采用浓度从0.01～0.4M变化的磷酸缓冲液作线性梯度洗脱蛋白溶液B，蛋白溶液B与洗脱液的总体积比为1:10～30，洗脱组份按时间间隔收集，每4～12分钟收集一管，分别测定每管收集液280nm和565nm处的吸光值，根据洗脱峰和OD565/OD280比值大小，收集比值≥2.6的较纯收集管内的蛋白溶液C；(6)凝胶过滤分子筛柱层析：采用含0.05～0.5M NaCl的0.01～0.2M磷酸缓冲液洗脱液洗脱蛋白溶液C，洗脱组份按时间间隔收集，每4～10分钟收集一管，分别测定每管收集液的280nm和565nm处的吸光值，根据OD565/OD280比值大小，收集纯度≥4.0的试剂纯藻红蛋白；B. 提取电泳纯卤素过氧化物酶：测定步骤A(4)中每管收集蛋白溶液B的卤素过氧化物酶活力及280nm处的吸光值，收集合并有酶活力的溶液，得到卤素过氧化物酶；将收集的溶液经0.01～0.1M、pH7～9Tris‑Cl缓冲液透析过夜，透析膜截留分子量为14000，提高酶活力；C. 琼脂提取：将步骤A(2)中浸提得粗蛋白之后的藻渣，于质量浓度0.5～9％NaOH溶液中处理，体系固液质量体积比为1:10～50，处理温度为50～100℃，时间是0.5～6小时；反应后用淡水冲洗藻体至中性；藻体浸泡于水中，水面没过藻 体，松散分布，充分接触光照，光照强度为0.5万～15万勒克司条件2～72小时，棕黄色藻体变成类白色，完成漂白过程；加藻体干重的30～40倍水量，常压沸水提胶或于表压0.05～0.07MPa下提胶，时间为1～4小时，80～500目筛网过滤；滤渣再次提胶，加藻体干重的15～20倍水量，常压沸水提胶或于表压0.05～0.07MPa下提胶，时间为0.5～2小时，80～500目筛网过滤，两次滤液合并，并收集废渣；滤液自然冷却凝固后得产品；凝固后产品切成细长方条，放于2～6℃预冷，时间为4～6小时；再放入‑20～‑25℃下冻结24～36小时；脱水，浸泡、清洗胶条、干燥即得条状琼脂；经干燥，粉碎，过100～300目筛可制成粉状产品；D. 微量元素饲料添加剂和微量元素肥料制备：步骤C琼脂提取后的废渣，置40～80℃烘干，称重，粉碎，过60～120目筛即得产品；以上过程所获得的产品为高品质琼脂、试剂纯藻红蛋白、卤素过氧化物酶及微量元素饲料添加剂和微量元素肥料。