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Procedimiento de medición de la cantidad de ácidos nucleicos de una secuencia diana en una muestra de interés, que comprende las etapas de: a. someter la muestra de interés a un tratamiento de amplificación, con un lote de reactivos que comprenden al menos un marcador de ácido (s) nucleico (s) específico para dicha secuencia diana, dicho tratamiento de amplificación que comprende ciclos de amplificación sucesivos, i; de 1 a n, b. medir una magnitud física Fi representativa de la evolución del marcador durante al menos una parte de los ciclos de amplificación, c. expresar un parámetro F0 representativo de la magnitud física del marcador de ácido (s) nucleico (s) antes de cualquier ciclo de amplificación, utilizando las mediciones llevadas a cabo en la etapa b., d. estimar el número inicial N0mues. de ácido (s) nucleico (s) de la secuencia diana utilizando una ley de conversión, que comprende parámetros contextuales, y aplicada a dicho parámetro F0 expresado en la etapa c, . caracterizado porque: - en la etapa d., dichos parámetros contextuales son unos parámetros de referencia pre-registrados, siendo estos parámetros sensiblemente independientes de al menos una parte de las condiciones experimentales, y estando determinados de antemano a partir del comportamiento de al menos una muestra de referencia del mismo formato biológico que la muestra de interés y el número inicial conocido N0ref de ácido (s) nucleico (s) .
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