农杆菌介导对麻风树进行基因转化的方法

摘要

本发明涉及农杆菌介导对麻风树进行基因转化的方法，包括以下步骤：制备麻风树外植体以及农杆菌液，外植体经农杆菌浸染后进行共培养；共培养后的外植体接入筛选培养基C13PC进行培养，从而获得抗性愈伤组织，该筛选培养基C13PC含有1-3mg/L草胺磷或1-10mg/L潮霉素；将得到的抗性愈伤组织转入分化培养基，分化出不定芽；经生根培养，获得转基因植株。利用本发明转基因方法成功导入功能基因，对野生麻风树进行遗传改良。转化效率可达10％左右甚至10％以上，转基因性遗传稳定，成本低廉，且麻风树离体再生系统稳定性好，操作简便，再生效率高，从愈伤组织的诱导到再生植株的获得只需要80-90天。

主权项

农杆菌介导对麻风树进行基因转化的方法，包括以下步骤：(1)制备麻风树外植体以及农杆菌液，外植体经农杆菌浸染后进行共培养，所述共培养采用C13A固体培养基，其中C13A固体培养基是指MS培养基含1.0‑3.0mg/L 6‑苄基嘌呤，0.25‑1.0mg/L 3‑吲哚丁酸，50‑200μM乙酰丁香酮，20‑30g/L蔗糖，7g/L琼脂，pH5.8‑6.0；(2)共培养后的外植体接入筛选培养基进行培养，从而获得抗性愈伤组织，所述筛选培养基为C13PC培养基，其为含1.0‑3.0mg/L 6‑苄基嘌呤，0.25‑1.0mg/L 3‑吲哚丁酸，1‑3mg/L草胺磷或1‑10mg/L潮霉素，250‑500mg/L头孢噻肟钠，2‑3％蔗糖，0.7％琼脂，以及pH5.8‑6.0的MS培养基；(3)分化出不定芽：是将获得的抗性愈伤组织，转入分化培养基SR13PC进行培养，该SR13PC培养基，是MS培养基含0.25‑2.0mg/L 6‑苄基嘌呤，0.1‑1.0mg/L 3‑吲哚丁酸，0.01‑0.2mg/L赤霉素，1‑3mg/L草胺磷或1‑10mg/L潮霉素，250‑500mg/L头孢霉素，20‑30g/L蔗糖，7g/L琼脂，以及pH5.8‑6.0；以及(4)生根培养，是将分化出的不定芽在0.1‑1.0mg/L的3‑吲哚丁酸溶液中浸泡2‑10分钟后，接种到1/2MS培养基进行生根培养，从而获得转基因植株。