一种快速分离辣椒疫霉菌的方法及其专用培养基

摘要

本发明提供一种快速分离辣椒疫霉菌的方法及其专用培养基，属植物病理学研究技术领域。该分离方法由病样处理、消毒、培养基配制等步骤组成。病样选用新鲜采集的病茎，以病样的病部与健康部分的交界处为中心，取9～11cm的病样组织，用自来水清洗后晾干表面水分，用75%酒精均匀喷雾，再用1%次氯酸钠液浸泡30秒后用无菌水清洗，晾干后在无菌操作台内将该大块消毒处理的病样剪成小块，利用专用培养基进行分离培养。本发明方法使辣椒疫霉菌的分离率平均达到81.99%，比常规（小块消毒处理，小块分离）处理方法分离率平均提高32.6%；分离用时平均仅需31.6分钟，分离时间平均缩短50.1%，并且操作简便易行。

主权项

一种快速分离辣椒疫霉菌的方法，其特征在于按以下步骤进行：（1）病样编号：分离前将采集辣椒植株上感染了辣椒疫病的病茎或病叶按不同采样的地点、品种进行编号；（2）病样切取：将编号后的病茎，以病样的病部与健康部的交界处为中心，切取病健部分共长度为9～11cm的病样，并使病样中病部组织的长度和健康部组织的长度各占病样长度的1/2，用自来水清洗后晾干表面水分；（3）病样消毒：将上述切取的病样用质量分数为75%酒精喷雾，再用质量分数为1%次氯酸钠液浸泡30秒，用无菌水清洗后晾干水分；（4）专用培养基的配制    将蒸馏水1000ml、黑麦60g、蔗糖20g和琼脂18g混合制成基本培养基，将所述的基本培养基高压灭菌后冷至40～50℃时，加入10mg的利福平和100mg剂型为70%五氯硝基苯粉剂，摇匀，即制成所述的专用培养基，然后倒入灭菌培养皿中备用；(5)无菌操作室分离  将步骤（3）的病样在无菌操作台内进行剪取分离培养，先剪去该病茎的四周，再以病样的病部与健康部的交界处为中心，剪成长度为0.4～0.5cm的病茎块，并使每块病茎中病部组织的长度和健康部组织的长度各占病茎块长度的1/2，再用镊子将所剪的0.4～0.5cm病样接入步骤（4）配制的专用培养基中，每皿接入5块病样，放在20℃恒温箱中培养，3‑5天后长出辣椒疫霉菌菌丝再进行转接纯化。