一种人脐带间充质干细胞库的构建方法

摘要

本发明公开了一种利用新生儿脐带为资源的脐带间充质干细胞库的构建方法，目的在于构建脐带间充质干细胞库时步骤更少、操作更加简单、容易。本发明由下述步骤组成：(1)取人脐带进行检测，用缓冲液冲洗去除残留血液，剪碎，获得人脐带组织；(2)加入胶原酶消化；(3)加入缓冲液稀释消化后组织，混匀、离心；(4)弃上清，加入缓冲液重悬沉淀，过筛，收集滤液，离心，重复两次，即得人脐带间充质干细胞；(5)将获得的人脐带间充质干细胞置液氮保存，按其ABO/Rh分型和HLA分型进行保存，建立可供检索的细胞信息档案，即构建出人脐带间充质干细胞库。与现有方法相比，本发明方法更快捷、更方便、对细胞损伤更小。

主权项

一种人脐带间充质干细胞库的构建方法，由下述步骤组成：(1)取人脐带进行ABO/Rh血型检测、HLA分型检测、微生物免疫检测、用缓冲液冲洗去除残留血液，剪碎，获得人脐带组织；(2)向步骤(1)所获得人脐带组织中加入1‑3倍体积的0.05％‑0.2％胶原酶消化，所述胶原酶消化温度为37℃，消化时间为2h，并获得消化后组织；(3)加入缓冲液稀释步骤(2)消化后组织，混匀、离心，离心力为600g，时间为15分钟；(4)弃上清，加入缓冲液重悬步骤(3)沉淀，过200目筛网，收集滤液，离心，离心力为450g，时间为10分钟，重复两次，即获得人脐带间充质干细胞；(5)将步骤(4)得到的人脐带间充质干细胞按2×104/cm2接种于塑料培养皿，用含10％FBS的LG‑DMEM培养基，置37℃、5％CO2培养箱培养，2天后换液，弃去非贴壁细胞，以后每3天后换液，待细胞80％汇合，0.25％胰酶消化，按1∶3传代，扩增后得到大量间充质干细胞，并用冷冻保护剂预处理，分装放入冻存管，所述冷冻保护剂由10％DMSO、10％右旋糖苷和80％LG‑DMEM组成。(6)将步骤(5)获得的人脐带间充质干细胞置液氮保存，按其ABO/Rh分型和HLA分型进行保存，建立可供检索的细胞信息档案，即构建出人脐带间充质干细胞库。