一种用于制备生物汽油的工程大肠杆菌

摘要

一种用于制备中碳脂肪醇的工程大肠杆菌和制备中碳脂肪醇的方法，该方法通过在大肠杆菌中过量表达硫脂酶基因，脂酰-CoA还原酶基因和脂肪醛脱羧酶基因等，使大肠杆菌获得生产生物汽油的能力，结合过量表达乙酰-CoA羧化酶基因并敲除大肠杆菌的脂酰-CoA脱氢酶基因，进一步提高工程大肠杆菌的生物汽油的生产能力。该方法可用于新一代要生物汽油的的生产。

主权项

一种用于制备生物汽油的工程大肠杆菌，通过下述方法得到通过聚合酶链式反应扩增乙酰‑CoA羧化酶基因、硫脂酶基因、脂酰‑CoA还原酶基因和脂肪醛脱羧酶基因，用胶回收试剂盒回收目的片段，然后分别双酶切目的片段和原核表达载体pET‑30a(+)或pACYCDuet‑1，载体片断胶回收后，将载体：基因片段按摩尔比为1‑2∶4‑5的比例混合，加入T4DNA连接酶后4‑7℃连接15‑30小时，连接产物38‑42℃热击转化E.coli DH5α感受态细胞，涂布平板培养过夜，PCR筛选阳性克隆；阳性克隆提取质粒DNA，酶切和测序鉴定后，热击转化E.coli BL21(DE3)，最后敲除该工程大肠杆菌的fadE基因后即得目标工程大肠杆菌。