一种多重PCR扩增方法及试剂盒

摘要

本发明公开了一种多重PCR扩增方法以及用于多重PCR扩增的试剂盒；所述多重PCR扩增方法包括了设计公共引物以及带有公共引物的多重引物的步骤，所述公共引物设计应遵循两条原则：（1）任何优化的扩增条件下，公共引物与待测模板进行扩增时无特异性产物；（2）当带有公共引物的多重引物扩增得到特异性产物时，公共引物对具有扩增所述特异性产物的能力；然后配置多重PCR体系进行扩增。本发明由于公共引物的引入，使反应体系内的序列特异性引物对浓度下降4个以上对数级别，如此低浓度的多重引物在同一个反应体系中出现相互作用的几率将大大降低，不仅可解决不同引物对相互干扰这一多重PCR中的技术瓶颈，亦为加入新的引物对、增加检测基因数量创造前提条件。

主权项

一种多重PCR扩增方法，其特征在于，包括以下步骤：（A）、以目的基因或目的基因的cDNA为模板，设计公共引物对；以目的基因或目的基因的cDNA为模板，根据所需扩增的片段设计多重引物，所述多重引物包括两对以上特异性引物对；在每一对特异性引物对中的正义引物的5'端连接公共引物对中的正义引物的3'端，在每一对特异性引物对中的反义引物的5'端连接公共引物对中的反义引物的3'端，得到带有公共引物的特异性引物对，所有带有公共引物对的特异性引物对构成带有公共引物的多重引物；所述公共引物设计应遵循两条原则：（1）任何优化的扩增条件下，公共引物与待测模板进行扩增时无特异性产物；（2）当带有公共引物的多重引物扩增得到特异性产物时，公共引物对具有扩增所述特异性产物的能力；（B）、配置多重PCR反应体系，所述多重PCR反应体系包括：dNTP、MgCl2、PCR缓冲液、模板DNA、Taq DNA聚合酶，所述多重PCR反应体系还包括：公共引物对、带有公共引物的多重引物，其中，公共引物对的浓度为0.25～0.6μmol/L，每一条带有公共引物的特异性引物的浓度5×10‑8～5×10‑10 μmol/L；（C）、按照现有技术，对多重PCR反应进行优化，按照优化后的条件进行PCR扩增。