一种固相合成阿托西班方法

摘要

本发明涉及一种固相合成阿托西班方法，包括如下步骤：1)以Rink Amide树脂为载体，脱Fmoc-保护后得到H2N-Rink Amide树脂；2)以HOBT、DIPCI为缩合试剂，将Fmoc-Gly-OH的羧基与树脂氨基相连，得到Fmoc-Gly(树脂)；3)采用Fmoc策略依次固相合成序列剩余氨基酸；4)用碘进行固相环化；5)然后用裂解试剂(三氟乙酸/硫代苯甲醚/1，2-乙二硫醇/水)切割，乙醚沉淀，得到阿托西班粗肽；6)粗品经HPLC制备分离得阿托西班纯品。

主权项

一种阿托西班的固相合成方法，其特征在于，所述方法如下：(1)制备Fmoc‑Gly‑树脂将100.00g Rink Amide树脂加入到反应柱中，加入DCM 550ml/次洗涤3次、再加入DMF550ml/次洗涤3次，向玻璃反应柱内加入配置好的30％的哌啶/DMF溶液550ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF 550ml/次洗涤6次，用5％的茚三酮乙醇溶液检测去保护效果；称取Fmoc‑Gly‑OH 23.79g及HOBT 10.80g，加入N、N‑二甲基甲酰胺搅拌溶解，完全溶解后加入12ml DIPCDI，搅拌均匀后加入到玻璃反应柱内，搅拌反应24小时，反应完毕后，抽去反应液，用DMF 550ml/次洗涤3次，再用DCM 550ml/次洗涤3次，最后用甲醇550ml/次洗涤3次，抽干，倒出，放入真空干燥箱干燥12h，取出称重，为103.19g，测定替代值为0.77mmol/g；(2)制备Fmoc‑Orn(Boc)‑Gly‑树脂将103.19g Fmoc‑Gly‑树脂加入到反应柱中，加入DCM 550ml/次洗涤3次、再加入DMF550ml/次洗涤3次，向玻璃反应柱内加入配置好的30％的哌啶/DMF溶液550ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF 550ml/次洗涤6次，用5％的茚三酮乙醇溶液检测去保护效果；称取Fmoc‑Orn(Boc)‑OH 108.34g及HOBT 32.21g，加入DMF搅拌溶解，完全溶解后加入lmmol/ml DIPCDI的DMF溶液37ml，搅拌均匀；将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应90min，抽去反应液，用DMF 550ml/次洗涤6次，取样用5％的茚三酮乙醇溶液检测偶联效果；(3)制备Fmoc‑Pro‑Orn(Boc)‑Gly‑树脂：向玻璃反应柱内加入配置好的30％的哌啶/DMF溶液550ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF 550ml/次洗涤6次，用5％的茚三酮乙醇溶液检测去保护效果；称取Fmoc‑Pro‑OH及HOBT 32.21g，加入DMF搅拌溶解，完全溶解后加入1mmol/ml DIPCDI的DMF溶液37ml，搅拌均匀；将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应90min；抽去反应液，用DMF550ml/次洗涤6次，取样用5％的茚三酮乙醇溶液检测偶联效果；(4)制备Fmoc‑Cys(Trt)‑Pro‑Orn(Boc)‑Gly‑树脂：向玻璃反应柱内加入配置好的30％的哌啶/DMF溶液550ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF 550ml/次洗涤6次，用5％的茚三酮乙醇溶液检测去保护效果；称取Fmoc‑Cys(Trt)‑OH 139.61g及HOBT 32.21g，加入DMF搅拌溶解，完全溶解后加入1mmol/mlDIPCDI的DMF溶液37ml，搅拌均匀；将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应90min；抽去反应液，用DMF 550ml/次洗涤6次，取样用5％的茚三酮乙醇溶液检测偶联效果；(5)制备Fmoc‑Asn(Trt)‑Cys(Trt)‑Pro‑Orn(Boc)‑Gly‑树脂：向玻璃反应柱内加入配置好的30％的哌啶/DMF溶液550ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF 550ml/次洗涤6次，用5％的茚三酮乙醇溶液检测去保护效果；称取Fmoc‑Asn(Trt)‑OH 142.23g及HOBT 32.21g，加入DMF搅拌溶解，完全溶解后加入1mmol/mlDIPCDI的DMF溶液37ml，搅拌均匀；将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应90min；抽去反应液，用DMF 550ml/次洗涤6次，取样用5％的茚三酮乙醇溶液检测偶联效果；(6)制备Fmoc‑Thr(tBu)‑Asn(Trt)‑Cys(Trt)‑Pro‑Orn(Boc)‑Gly‑树脂：向玻璃反应柱内加入配置好的30％的哌啶/DMF溶液550ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF 550ml/次洗涤6次，用5％的茚三酮乙醇溶液检测去保护效果；称取Fmoc‑Thr(tBu)‑OH 139.61g及HOBT 32.21g，加入DMF搅拌溶解，完全溶解后加入1mmol/mlDIPCDI的DMF溶液37ml，搅拌均匀；将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应90min；抽去反应液，用DMF 550ml/次洗涤6次，取样用5％的茚三酮乙醇溶液检测偶联效果；(7)制备Fmoc‑Ile‑Thr(tBu)‑Asn(Trt)‑Cys(Trt)‑Pro‑Orn(Boc)‑Gly‑树脂：向玻璃反应柱内加入配置好的30％的哌啶/DMF溶液550ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF 550ml/次洗涤6次，用5％的茚三酮乙醇溶液检测去保护效果；称取Fmoc‑Ile‑OH84.24g及HOBT 32.21g，加入DMF搅拌溶解，完全溶解后加入1mmol/ml DIPCDI的DMF溶液37ml，搅拌均匀；将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应90min；抽去反应液，用DMF 550ml/次洗涤6次，取样用5％的茚三酮乙醇溶液检测偶联效果；(8)制备Fmoc‑D‑Tyr(Et)‑Ile‑Thr(tBu)‑Asn(Trt)‑Cys(Trt)‑Pro‑Orn(Boc)‑Gly‑树脂：向玻璃反应柱内加入配置好的30％的哌啶/DMF溶液550ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF 550ml/次洗涤6次，用5％的茚三酮乙醇溶液检测去保护效果；称取Fmoc‑D‑Tyr(Et)‑OH 103.02g及HOBT 32.21g，加入DMF搅拌溶解，完全溶解后加入1mmol/mlDIPCDI的DMF溶液37ml，搅拌均匀；将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应90min；抽去反应液，用DMF 550ml/次洗涤6次，取样用5％的茚三酮乙醇溶液检测偶联效果；(9)制备Mpr(Trt)‑D‑Tyr(Et)‑Ile‑Thr(tBu)‑Asn(Trt)‑Cys(Trt)‑Pro‑Orn(Boc)‑Gly‑树脂：向玻璃反应柱内加入配置好的30％的哌啶/DMF溶液550ml，搅拌反应30min，抽除反应液，加入DMF 550ml/次洗涤6次，用5％的茚三酮乙醇溶液检测去保护效果；称取Mpr(Trt)‑OH83.06g及HOBT 32.21g，加入DMF搅拌溶解，完全溶解后加入1mmol/ml DIPCDI的DMF溶液37ml，搅拌均匀；将配制好的氨基酸偶联液加入到反应柱内，搅拌反应90min；抽去反应液，用DMF 550ml/次洗涤6次，取样用5％的茚三酮乙醇溶液检测偶联效果；(10)环化称取31.73g碘加入1250ml DMF中搅拌溶解，完全溶解后加入到反应柱内，氮气吹搅反应30min；反应完毕后，抽去反应液，用DMF 1250ml/次洗涤3次，再用DCM 1250ml/次洗涤3次，最后用甲醇1250ml/次洗涤3次，抽干，倒出，放入真空干燥箱干燥12h；(11)裂解将环化后的树脂加入到圆底烧瓶中，加入配制好的裂解试剂2200ml，搅拌反应120min，其中所述裂解试剂为三氟乙酸∶硫代苯甲醚∶1，2‑乙二硫醇∶水＝90％∶5％∶3％∶2％；过滤，树脂用三氟乙酸洗涤3次；合并滤液，缓慢沉降到22000ml的无水乙醚中；静置2h后开始离心，离心完毕后用无水乙醚2500ml/次离心洗涤6次，将得到的粗肽放入真空干燥箱内抽干，即得氧化型阿托西班粗品。