一种来自斑蝥的纤溶活性蛋白及其制备方法和应用

摘要

本发明公开了一种来自斑蝥的纤溶活性蛋白及其制备方法和应用，本发明从斑蝥中提取一种具有纤溶活性的单一组分蛋白，其分子量为95.5KD，易于纯化和批量制备，并且纤溶活性较强，比活高，无毒性；分子量小、抗原反应低，是较为理想的纤溶酶制剂原料，是理想的溶栓药物；本发明还公开了这种纤溶活性蛋白的制备方法，以及这种纤溶活性蛋白在制备治疗血液栓塞疾病的药物中的应用。

主权项

一种来自斑蝥的纤溶活性蛋白的制备方法，其特征在于该方法有如下步骤：1)将干斑蝥剪碎，加入磷酸钠缓冲液，浸泡，磨碎，4℃浸提过夜；2)离心去沉淀，分段盐析，取20％～80％部分沉淀，加少量磷酸钠缓冲液溶解，透析除盐，浓缩，得到粗提物；3)将步骤2)得到的粗提物通过DEAE‑32离子交换层析，用含有氯化钠的Tris‑HCl缓冲液分段洗脱，收集活性蛋白峰，透析除盐，浓缩，冻干；所述步骤1)以及步骤2)中的磷酸钠缓冲液其pH7.2，浓度为0.02mol/L；所述步骤1)中干斑蝥重量与磷酸钠缓冲液体积之比为1∶10；浸泡时间为2h；磨碎方式为实验用组织破碎机或家用榨汁机磨碎；所述步骤2)中磷酸钠缓冲液的加入量与步骤1)中磷酸钠缓冲液的加入量按体积之比为1～2∶100；所述步骤2)分段盐析为在上清液中加固体硫酸铵达20％饱和度，8000转/分，4℃高速离心机中离心30min，收集上清液；再加入固体硫酸铵达80％饱和度，8000转/分，4℃高速离心机中离心30min，收集沉淀；步骤3)所述离子交换层析是二乙氨基乙基‑32纤维素离子交换柱，所述洗脱缓冲液是分别含有0.1、0.2、0.5mol/L氯化钠的0.02mol/LpH8.0的三羟甲基氨基甲烷‑盐酸缓冲液。