一种实时荧光PCR方法及用途

摘要

本发明涉及一种实时荧光PCR方法及用途，该方法仅需要一对上下游引物和一条检测探针即可，其中上游引物和检测探针分别进行单标记。上游引物包含三个区域，特异引物序列3、特异检测序列2及附加序列13；下游引物按照一般的引物设计原则设计即可；检测探针包括特异检测序列5。特异检测序列2与上游引物的延伸序列形成唯一的颈环结构，该结构由特异检测序列2引导形成，同时检测探针杂交于相邻位置。本方法的特异性好，选择性强，探针和引物设计简单灵活，易于纯化，产率高，可用于实时监测扩增产物量实现目标序列的定性及定量分析，且可进行熔解曲线分析，特别适用于检测SNP或突变位点，区分单碱基差异能力强。

主权项

一种实时荧光PCR检测方法，采用上游引物15、下游引物6和一条检测探针16进行检测，其特征在于，上游引物15的序列为：修饰基团1－附加序列13和特异检测序列2－特异引物序列3，所述特异引物序列3为与模板上目标序列10反向互补的序列，所述特异检测序列2为序列11的反向互补序列，其中序列11与序列17互补杂交，所述附加序列13为任意的不与模板杂交的核酸附加序列，所述修饰基团1为荧光基团或者淬灭基团或者供体荧光基团或者受体荧光基团；所述检测探针16为修饰基团4－特异检测序列5，所述特异检测序列5为序列12的反向互补序列，其中序列12与序列18反向互补，序列17为模板上目标序列10的延伸序列并远离模板的3’端，序列18为模板上序列17的延伸序列并远离目标序列10的一端，所述修饰基团4为淬灭基团或者荧光基团或者受体荧光基团或者供体荧光基团。