肿瘤粘蛋白糖肽抗原决定部位的单克隆抗体库的制备方法

摘要

本发明涉及一种肿瘤粘蛋白糖肽抗原决定部位的单克隆抗体库的制备方法。该方法是先根据粘蛋白的氨基酸序列，推测可能出现的所有肿瘤糖肽序列；然后用粘蛋白基因转染肿瘤细胞，得到用于免疫小鼠制备单克隆抗体的免疫原；再用化学合成的方法合成上述推测出的所有糖肽，并分别用生物素标记，得到筛选单克隆抗体的生物素标记的糖肽；最后用上述的免疫原免疫小鼠，制备杂交瘤，然后用上述生物素标记的糖肽筛选杂交瘤，挑选出针对各个特定糖肽结构的单克隆抗体。本发明首次提出用免疫糖组学方法，推测了高度糖基化的串联重复多肽片段在癌变时所有可能产生的抗原决定部位。用化学合成的方法得到这些糖肽抗原；然后用合成的糖肽来“钓取”单克隆抗体。

主权项

一种肿瘤粘蛋白糖肽抗原决定部位的单克隆抗体库的制备方法，包括以下步骤：步骤1： 根据粘蛋白的氨基酸序列，推测可能出现的所有肿瘤糖肽序列；步骤2： 免疫原的制备：用粘蛋白基因转染肿瘤细胞Jurkat，得到用于免疫小鼠制备单克隆抗体的免疫原；步骤3：用化学合成的方法合成步骤1中推测出的所有糖肽，并分别用生物素标记，得到筛选单克隆抗体的生物素标记的糖肽；步骤4： 单克隆抗体库的制备，用步骤2的免疫原免疫小鼠，制备杂交瘤，然后用步骤3中生物素标记的糖肽筛选杂交瘤，挑选出针对各个特定糖肽结构的单克隆抗体。