一种用于PCR扩增的真菌DNA快速提取方法

摘要

本发明公开了一种用于PCR扩增的真菌DNA快速提取方法，包括以下步骤：(1)培养真菌，得到真菌菌丝体；(2)将真菌菌丝体置于装有裂解液的离心管中；(3)将离心管交替冻融；(4)离心，取上清，加入95％乙醇，混匀，液氮速冻，离心，弃上清，将沉淀风干，即得。本发明方法操作简单，省时省力且减少了研磨过程中真菌DNA的损失，无需用苯酚和氯仿抽提，避免了有毒试剂的接触。本发明方法所提取DNA完整性好，纯度高，收率高，可直接用于PCR扩增反应，能够高效扩增出用于克隆和测序的目的产物。本发明方法提高了真菌DNA的提取效率，降低了真菌DNA提取的成本，可有效提高真菌的分子鉴定和检测效率。

主权项

一种用于PCR扩增的真菌DNA快速提取方法，包括以下步骤：(1)培养有待提取DNA的真菌，得到真菌菌丝体；所述的真菌选自刺芹侧耳(Pleurotus eryngii)、白黄侧耳(Pleurotus cornucopiae)、袖珍侧耳(Pleurotus geesteyanus)、虎奶菇(Pleurotus tuber‑regium)、长柄平菇(Pleurotus spodoleucus)、平菇(Pleurotus ostreatus)、鲍鱼侧耳(Pleurotus abalonus)、葡萄座腔菌(Botryosphaeria dothidea)、尖孢镰刀菌(Fusarium oxysporum)、围小丛壳菌(Glomerella cingulata)、果生链核盘菌(Monilinia fructigena)、芒果炭疽病菌(Colletotrichum gloeosporioides)或淡紫拟青霉(Paecilomyces lilacinus)；(2)将真菌菌丝体置于装有裂解液的离心管中；所述裂解液的组成成份为：10mM Tris‑HCl，pH8.0，1mM EDTA，250mM NaCl，1％SDS；(3)将离心管交替冻融；所述的交替冻融是指装有真菌菌丝体的离心管中置入液氮中速冻30秒‑2分钟然后迅速转入沸水中煮2‑10分钟；(4)离心，取上清转入无菌离心管，加入两倍体积的95％乙醇，颠倒混匀，用液氮速冻，离心，弃上清，将沉淀风干，即得。