一种用醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜固定化脂肪酶的方法

摘要

本发明提供一种以醋酸纤维素和聚四氟乙烯膜为材料制备了醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜，采用吸附-交联相结合的固定化方法，用该复合膜来固定化脂肪酶。研究了温度、吸附时间、酶液浓度、交联时间和交联剂浓度等不同固定化条件对脂肪酶固定化效率和催化效果的影响，并对固定化酶膜的酶学性质进行了讨论。通过固定化酶膜的SEM图像进一步解释利用醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜固定化脂肪酶的优势。根据本发明中复合膜的吸附特性固定化脂肪酶，提高了酶在反应体系中的活性和稳定性，调节和控制酶的活性与选择性，从而有利于酶的回收和产品的生产，最终得到的固定化酶活为17.2U/cm2，明显高于文献中单膜法固定化脂肪酶的活力。

主权项

一种用醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜固定化脂肪酶的方法，其特征在于用复合膜来固定化脂肪酶的方法通过以下步骤实现：一、复合膜的制备：将15g醋酸纤维素60℃下溶于85g二甲基甲酰胺中得到铸膜液。将聚四氟乙烯膜先用0.1mol/L的NaOH溶液和0.1mol/L的HCl溶液清洗，然后用去离子水清洗，真空干燥后，平铺在洁净的玻璃板上。将醋酸纤维素铸膜液用特制的刮刀涂在聚四氟乙烯膜表面，控制厚度，在室温下挥发适当的时间完成干相转换后，浸入去离子水完成湿相转换。12h后用去离子水清洗，自然干燥待用；二、脂肪酶的固定化：取若干份1cm2的醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜于三角瓶中，分别加入一定量的酶液和pH 7.5的磷酸氢二钠/磷酸二氢钾缓冲液，恒温搅拌吸附一定时间(25℃，170r/min)。再加入一定量戊二醛进行交联反应，反应结束后取出酶膜，用去离子水冲洗，放于干燥处待其风干后测定酶活。三、酶活力的测定：采用橄榄油乳化法；四、固定化条件的优化：分别在温度5～35℃，吸附时间0.5～3h，酶液浓度0.005～0.03g/mL，交联时间1～6h，交联剂浓度0.05～0.3％的条件下，通过测定固定化酶活力得到最佳的固定化条件。五、固定化酶酶学性质的讨论：在温度15～55℃，pH 5.5～9.5范围内，通过测定固定化酶和游离酶的活力，得出固定化酶的最适温度，最适pH值。并通过重复使用固定化酶水解橄榄油来讨论固定化酶的使用稳定性。六、通过固定化酶膜的SEM图像进一步解释利用醋酸纤维素/聚四氟乙烯复合膜固定化脂肪酶的优势。