一种抗植物病毒的黑平菇蛋白及其制备方法和用途

摘要

本发明公开了一种黑平菇蛋白PoAP及其制备方法，首先将黑平菇菌丝干粉在磷酸缓冲液中浸提1～3小时，离心，收集上清液；然后分别向所得上清液中加入硫酸铵至饱和度为40％和70％，2～6℃放置6～12小时，离心，收集沉淀；用磷酸缓冲液溶解沉淀，接着用重蒸馏水进行透析；再经阴离子交换柱分离，用0.5M NaCl洗脱，收集洗脱峰；然后经30KD超滤管超滤，5000rpm离心超虑40min，所得溶液中的物质即为黑平菇蛋白。本发明黑平菇蛋白PoAP为单一蛋白，可进行遗传工程应用；其次，对烟草花叶病毒抑制效果好；且为天然提取物，对人类和环境均无害；另外，黑平菇蛋白制备方法简单，原料易得，成本较低。

主权项

一种抗烟草花叶病毒的黑平菇蛋白，其特征在于所述的黑平菇蛋白来自黑平菇，其N端氨基酸序列为：DAATGYRSVAYFVNWAIYGR；所述的黑平菇蛋白，按照如下方法制备：(1)将黑平菇菌丝干粉与pH值为7.0～9.0的磷酸缓冲液混合，在2～6℃浸提1～3小时，离心，收集上清液，得黑平菇菌丝粗提液；所述的黑平菇菌丝干粉的重量与磷酸缓冲液的混合比例为1g∶10～20ml；(2)向黑平菇菌丝粗提液中加入硫酸铵至饱和度为40％，于2～6℃放置6～12小时，离心，收集上清液；(3)向步骤(2)所得上清液中加入硫酸铵至饱和度为70％，于2～6℃放置6～12小时，离心，收集沉淀，得黑平菇蛋白粗提物；(4)用0.01～0.03mol/L、pH6.0～9.0的PBS缓冲液将所得黑平菇蛋白粗提物溶解，然后在1～3倍重量的重蒸馏水中透析8～16小时；(5)透析后的黑平菇蛋白粗提物经阴离子交换柱分离，用0.5M NaCl洗脱时收集洗脱峰；(6)收集的洗脱峰经30KD超滤管超滤，再经5000rpm离心超虑40min，所得溶液中的物质即为黑平菇蛋白。