细胞角蛋白19 mRNA的测定方法

摘要

细胞角蛋白19的mRNA的扩增/检测方法，在RNA扩增步骤中，通过被设计成当其与扩增后的RNA形成互补的双链时信号特性发生变化的寡核苷酸探针，经时地测定扩增后的RNA产物量，其中，所述RNA扩增步骤包括如下步骤：使用由具有与细胞角蛋白19 mRNA中的一部分同源的序列的第一引物、具有与该细胞角蛋白19 mRNA中的一部分互补的序列的第二引物(第一或第二引物中任意一个的5’末端附加有启动子序列)构成的寡核苷酸的组合，通过逆转录酶，生成含有启动子序列的双链DNA，以该双链DNA为模板、利用RNA聚合酶生成RNA转录产物，接着以该RNA转录产物为利用所述逆转录酶合成DNA的模板，生成所述双链DNA。

主权项

一种试样中的细胞角蛋白19(以下记为“CK19”)mRNA的测定方法，其特征在于，所述测定方法使用了具有与CK19 mRNA内的特定碱基序列的一部分同源的序列的第一引物、以及具有与特定碱基序列的一部分互补的序列的第二引物，其中第一或第二引物中任意一个的5’末端附加有RNA聚合酶的启动子序列，且所述测定方法包括下述的步骤：(1)以RNA为模板利用具有RNA依赖性DNA聚合酶活性的酶合成与特定碱基序列互补的cDNA的步骤；(2)利用具有核糖核酸酶H(RNase H)活性的酶将所述(1)的反应中得到的RNA‑DNA双链的RNA分解的步骤(单链DNA的生成)；(3)以单链DNA为模板利用具有DNA依赖性DNA聚合酶活性的酶生成具有可转录所述特定碱基序列或与所述特定碱基序列互补的序列的RNA的启动子序列的双链DNA的步骤；(4)利用具有RNA聚合酶活性的酶以所述双链DNA为模板生成RNA转录产物的步骤；(5)通过使该RNA转录产物成为所述(1)的反应中的cDNA合成的模板而连锁地生成RNA转录产物的步骤；和(6)测定所述RNA转录产物量的步骤，并且，所述第一和第二引物为以下的任意一组：(i)所述第一引物为由以序列号1表示的碱基序列中的至少15个连续的碱基形成的寡核苷酸，所述第二引物为由以序列号5表示的碱基序列中的至少15个连续的碱基形成的寡核苷酸；(ii)所述第一引物为由以序列号2表示的碱基序列中的至少15个连续的碱基形成的寡核苷酸，所述第二引物为由以序列号6表示的碱基序列中的至少15个连续的碱基形成的寡核苷酸；(iii)所述第一引物为由以序列号3表示的碱基序列中的至少15个连续的碱基形成的寡核苷酸，所述第二引物为由以序列号7表示的碱基序列中的至少15个连续的碱基形成的寡核苷酸；和(iv)所述第一引物为由以序列号4表示的碱基序列中的至少15个连续的碱基形成的寡核苷酸，所述第二引物为由以序列号8表示的碱基序列中的至少15个连续的碱基形成的寡核苷酸。