一种鸡隐性白羽基因的分子鉴定方法

摘要

本发明属于鸡分子标记制备技术领域。具体涉及鸡隐性白羽基因的分子鉴定方法。建立了一种鸡隐性白羽基因分子鉴定方法，利用鸡隐性白羽控制基因(插入逆转录病毒的TYR基因)和有色羽控制基因TYR基因的核苷酸序列分别设计了引物对1和引物对2，其中引物对1用于检测隐性白羽等位基因，引物对2用于检测有色羽等位基因。方法是：提取待鉴定鸡的基因组DNA，用引物对1和引物对2做PCR扩增；电泳检测扩增产物；根据电泳结果判断鸡的羽色基因型：若只有引物对1扩增出产物，则为隐性白羽纯合子(表型为白羽)；若只有引物对2扩增出产物，则是非隐性白羽纯合子(表型可能为有色或白羽)；若两对引物均能扩增出产物，则是隐性白羽杂合子(表型可能为有色或白羽)。本发明为鸡隐性白羽基因型鉴定提供了一种快捷的方法。

主权项

一种鸡隐性白羽基因的分子鉴定方法，其特征在于，(1)根据鸡TYR基因隐性白羽和有色羽的个体中核苷酸序列的差异，分别设计引物对1和引物对2；其中引物对1用于检测鸡隐性白羽等位基因，引物对2用于检测鸡有色羽等位基因；(2)提取待鉴定鸡的基因组DNA，用引物对1和引物对2分别进行PCR扩增，分别得到如序列表SEQ ID NO：1和序列表SEQ ID NO：2所示的核苷酸序列；(3)电泳检测步骤(2)PCR扩增的产物，根据电泳图谱中出现条带数及大小判定结果；(4)进行基因型分型；其中：步骤(1)所述引物对1的正向引物为5’GTTGCCTCTGGCTCTATT 3’，反向引物为5’TTTCTGTGAGTAAGGGTTG 3’；所述引物对2的正向引物为5’TTGTTGGAGGCTGGGTAT 3’，反向引物为5’ATGGGCTTGCTTGAGGTA 3’；步骤(2)所述的PCR扩增步骤如下：1)检测扩增的产物是否有逆转录病毒基因插入：以引物对1为扩增引物建立20ul体系如下：10×PCR缓冲液，10mM/L的dNTP，25mM/L的MgCl2，2.5U的Tag聚合酶，10umol/L的模板，加适量双蒸水至20ul；反应程序为94℃预变性5min，94℃变性40s，53.3℃退火40s，72℃延伸15s，30个循环，72℃再延伸5min，4℃下保存备用；2)检测扩增的产物是否是正常的TYR基因：以引物对2为扩增引物；建立20ul反应体系：10×PCR缓冲液，10mM/L的dNTP，25mM/L的MgCl2，2.5U的Tag聚合酶，10umol/L的模板，加适量双蒸水至20ul；反应程序为：94℃预变性5min，94℃变性40s，53℃退火40s，72℃延伸35s，30个循环，72℃再延伸5min，于4℃下保存备用。