体外检测遗传性耳聋相关缝隙连接蛋白26基因GJB2突变的方法及检测用试剂盒

摘要

一种体外检测遗传性耳聋相关缝隙连接蛋白26基因GJB2突变的方法，通过进行聚合酶链反应，对GJB2基因基础启动区、外显子1、外显子2及剪切区域进行完整扩增，然后进行DNA序列测定，检测GJB2基因突变的存在；本发明的方法能完整覆盖GJB2基因基础启动区、外显子1和外显子2及剪切区域的所有突变，能提高GJB2基因突变的检出率和GJB2基因相关性遗传性耳聋的诊断率，较单独进行GJB2编码区测序更全面、可靠，有利于遗传性耳聋的诊断。

主权项

一种进行体外检测GJB2基因突变的试剂盒，其特征在于含有：(1)PCR扩增反应试剂：包括dNTP、扩增外显子1用的2×PCR缓冲液、扩增外显子2用的10×PCR缓冲液、Mg++、三蒸水、扩增外显子1用的Taq酶1、扩增外显子2用的Taq酶2；(2)等比例混合的扩增GJB2基因基础启动区、外显子1及其剪切区域的正向引物F1和扩增GJB2基因基础启动区、外显子1及其剪切区域的反向引物R1，等比例混合的扩增GJB2基因外显子2及其剪切区域的正向引物F2和扩增外显子2及其剪切区域的反向引物R2；其中扩增基础启动区、外显子1及其剪切区域的正向引物F1是GJB2基因的核苷酸414‑445，其序列为序列表中的SEQID NO：1：扩增基础启动区、外显子1及其剪切区域的反向引物R1是GJB2基因的核苷酸895‑921，其序列为序列表中的SEQ ID NO：2；扩增外显子2及其剪切区域的正向引物F2是GJB2基因的核苷酸3860‑3879，其序列为序列表中的SEQID NO：3；扩增外显子2及其剪切区域的反向引物R2是GJB2基因的核苷酸4800‑4819，其序列为序列表中的SEQ ID NO：4。