一种抗体亲和层析纯化溶葡萄球菌酶的方法

摘要

本发明公开了一种抗体亲和层析纯化溶葡萄球菌酶的方法，包括如下步骤：(1)将含有溶葡萄球菌酶抗体样品通过用缓冲液A平衡好的装有protein A树脂的层析柱，清洗，洗脱，收集洗脱峰冻干；(2)将冻干产物与亲和层析介质混合，制得免疫亲和层析介质；(3)将溶葡萄球菌酶样品通过预先用缓冲液A平衡好的装有免疫亲和层析介质的层析柱；然后用缓冲液A清洗上样后的免疫亲和层析柱；再用缓冲液C将溶葡萄球菌酶从层析柱上洗脱，收集洗脱峰。本发明的方法，活性蛋白回收率为85～95％，比活性大于1000U/mg，蛋白纯化倍数为3-5以上，纯度可达到95-98％，处理速度快、回收率高及重复性好、柱效长且结合效率基本不变。

主权项

一种抗体亲和层析纯化溶葡萄球菌酶的方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)溶葡萄球菌酶抗体的处理：将含有溶葡萄球菌酶抗体的样品通过预先用缓冲液A平衡好的装有proteinA树脂的层析柱，然后用缓冲液A清洗上样后的proteinA层析柱；再用pH2.0～4.0的缓冲液B将溶葡萄球菌酶抗体从层析柱上洗脱，并收集洗脱峰，冻干；(2)免疫亲和层析介质的制备将步骤(1)收集的冻干产物与亲和层析介质混合，偶联反应，制得免疫亲和层析介质；(3)溶葡萄球菌酶用免疫亲和层析介质进行纯化将溶葡萄球菌酶样品通过预先用缓冲液A平衡好的装有步骤(2)的免疫亲和层析介质的层析柱；然后用缓冲液A清洗上样后的免疫亲和层析柱；再用pH2.5～4.5的缓冲液C将溶葡萄球菌酶从层析柱上洗脱，并收集洗脱峰；所述缓冲液A选自PBS、Tris‑HCl或硼酸缓冲液中的一种以上，缓冲液A的pH为7.0‑9.0；所述缓冲液B选自Na2HPO4‑柠檬酸、Gly‑HCl或邻苯二甲酸‑HCl缓冲液中的一种以上；所述缓冲液C选自醋酸‑醋酸钠、Na2HPO4‑柠檬酸或柠檬酸‑柠檬酸钠缓冲液中的一种以上。