一种生产鸭疫里氏杆菌疫苗用菌液的方法

摘要

本发明公开了一种生产鸭疫里氏杆菌疫苗用菌液的方法，包括一级种子的繁殖与鉴定、二级种子的繁殖、发酵；所述的一级种子的繁殖与鉴定为：将冻干基础菌种接入含10％犊牛血清的营养肉汤，37℃培养24小时；然后划线接种在含10％犊牛血清营养琼脂平板上，在含5～10％CO2或者烛缸的环境中，经37℃、24～48小时培养后选典型菌落接种含10％犊牛血清营养琼脂斜面若干支，置37℃、5-10％CO2或者烛缸环境下培养24小时，作为一级种子；所述的二级种子繁殖为：取一级种子接种于含10％犊牛血清的营养肉汤，置37℃培养24小时，取样作纯粹检验合格后，置2～8℃保存，使用期不得超过5日；所述的发酵，发酵所用的培养基为：含1％裂解全血的N-J合成培养基；发酵的菌种接种量为：按培养基量的2％接种二级种子液；发酵方式为：培养罐液体发酵培养；培养条件为：37℃连续培养24小时。

主权项

一种生产鸭疫里氏杆菌疫苗用菌液的方法，其特征在于，包括一级种子的繁殖与鉴定、二级种子的繁殖、发酵；所述的一级种子的繁殖与鉴定为：将冻干基础菌种接入含10％犊牛血清的营养肉汤，37℃培养24小时；然后划线接种在含10％犊牛血清营养琼脂平板上，在含5～10％CO2或者烛缸的环境中，经37℃、24～48小时培养后选典型菌落接种含10％犊牛血清营养琼脂斜面若干支，置37℃，5‑10％CO2或者烛缸环境下培养24小时，作为一级种子；所述的二级种子繁殖为：取一级种子接种于含10％犊牛血清的营养肉汤，置37℃培养24小时，取样作纯粹检验合格后，置2～8℃保存，使用期不得超过5日；所述的发酵，发酵所用的培养基为：含1％裂解全血的N‑J合成培养基；发酵的菌种接种量为：按培养基量的2％接种二级种子液；发酵方式为：培养罐液体发酵培养；培养条件为：37℃连续培养24小时；所述含1％裂解全血的N‑J合成培养基包括基础培养基和添加物，所述基础培养基的组分及比例为：胰蛋白胨，1.5‑1.9％；酵母提取物，0.2‑0.7％；牛肉浸膏，0.2‑0.7％；水解乳蛋白，0.2‑0.7％；葡萄糖，0.1‑0.4％；NaCl，0.5％；磷酸二氢钾，0.1‑0.7％；磷酸氢二钾，0.1‑0.7％；Na2HPO4·12H2O，0.5‑0.9％；(NH4)2SO4，0.1‑0.2％；NH4Cl，0.01‑0.03％；其中所述各组分的百分比为重量/体积百分比；所述添加物为裂解血球全血，裂解血球全血按体积比1％加入基础培养基中。