| 摘要 |
1. Способ получения нейтральной металлопротеазы, включающий: ! i) предоставление клетки-хозяина Bacillus, лишенной эндогенного фермента сериновой щелочной протеазы (AprE), эндогенного фермента внеклеточной нейтральной металлопротеазы (NprE) и эндогенного фермента минорной внеклеточной сериновой протеазы (Vpr); ! ii) трансформацию указанной клетки-хозяина Bacillus нуклеиновой кислотой, кодирующей гетерологичный фермент NprE в оперативной связи с промотором, для получения трансформированной клетки-хозяина и ! iii) культивирование указанной трансформированной клетки-хозяина в условиях, подходящих для продукции гетерологичного фермента NprE, так что продуцируется гетерологичный фермент NprE. ! 2. Способ по п.1, дополнительно включающий выделение указанного продуцируемого гетерологичного фермента NprE. ! 3. Способ по п.1, где указанная клетка-хозяин Bacillus представляет собой B.subtilis. ! 4. Способ по п.1, где указанная клетка-хозяин Bacillus дополнительно лишена эндогенного фермента минорной внеклеточной сериновой протеазы (Epr). !5. Способ по п.1, где указанная клетка-хозяин Bacillus дополнительно лишена эндогенного фермента главной внутриклеточной сериновой протеазы (IspA) и/или эндогенного фермента бациллопептидазы F (Bpr). ! 6. Способ по п.1, где указанная клетка-хозяин Bacillus лишена эндогенного фермента протеазы, связанной с клеточной стенкой (WprA), и/или эндогенного фермента внеклеточной металлопротеазы (Mpr). ! 7. Способ по п.1, где указанный гетерологичный фермент NprE представляет собой фермент NprE Bacillus amyloliquefaciens или его вариант. ! 8. Способ по п.7, где указанный вариант NprE Bacillus amyloliquefaciens обладает аминокислотной последовательностью, включающей замену, по меньшей м |
