IBDV无血清微载体悬浮培养增殖的方法

摘要

本发明提供了一种IBDV无血清微载体悬浮培养增殖的方法，包括下列步骤：1）Vero细胞的无血清培养的驯化；2）IBDV病毒增殖：将驯化的细胞接种到含0.25%的乳清蛋白水解物的无血清培养基，待细胞粘附到微载体并开始生长时接种IBDV病毒，90h收获病毒。本发明对从ATCC引进的Vero细胞进行驯化，降血清的培养，最终获得无血清微载体培养条件下的Vero细胞，同时改进IBDV病毒增殖时培养基成分，减少外源性病毒的影响，提高IBDV在无血清微载体培养条件下的病毒效价。通过优化病毒繁殖培养基增殖的IBDV病毒效价高于未优化培养基增殖的IBDV和采用鸡胚成纤维细胞增殖的IBDV病毒效价；与Vero细胞有血清培养的IBDV相当；免疫原性实验表明：该病毒的免疫原性强，适合作为疫苗生产。

主权项

IBDV无血清微载体悬浮培养增殖的方法，其特征在于，包括下列步骤：1）Vero细胞的无血清培养的驯化：逐步降低Vero细胞培养基中的血清浓度，在15代之内将血清降低到0.2%；将低血清培养的细胞转到无血清培养基中培养，待细胞适应后，扩增细胞作为种子库细胞；2）IBDV病毒增殖：将驯化的细胞接种到含0.25%的乳清蛋白水解物的无血清培养基，待细胞粘附到微载体并开始生长时接种IBDV病毒，90h收获病毒。