抗代谢类化疗药物疗效相关基因mRNA表达水平检测液相芯片和检测方法

摘要

本发明公开了一种抗代谢类化疗药物疗效相关基因mRNA表达水平检测液相芯片，所述检测液相芯片，主要包括有：与胺基修饰的支持探针偶联的微球；连接支持探针与目标基因mRNA的支持延伸探针，每条支持延伸探针包括5’端能与对应的目标基因mRNA结合的特异性序列、间隔臂序列、3’端的能与对应的支持探针的特异性序列互补配对的序列；连接目标基因mRNA与信号检测组分间的扩增延伸探针，每条扩增延伸探针包括5’端能与目标基因mRNA结合的特异性序列、间隔臂序列、3’端能与标记探针互补配对的序列。本发明还公开了运用该液相芯片对抗代谢类化疗药物疗效相关基因mRNA表达水平检测的方法。本发明检测过程无需RNA提取、逆转录、PCR等步骤，检测结果受样本中RNA的质量影响较小，保证了检测结果的准确性；另一方面，由于液相芯片技术使多指标并行检测成为了现实，在一次检测中可设置多个内参基因，使检测结果更为可靠。

主权项

一种抗代谢类化疗药物疗效相关基因mRNA表达水平检测液相芯片，其特征是，包括有：(1)与胺基修饰的支持探针偶联的微球，每条支持探针主要包括5’端的间隔臂序列和3’端能与支持延伸探针互补配对的特异性序列P1，所述支持探针选自SEQ.NO.1‑SEQ.NO.5，每个目标基因选用一种微球，每种微球具有不同的荧光编码；(2)连接支持探针与目标基因mRNA的支持延伸探针，每条支持延伸探针主要包括5’端能与对应的目标基因mRNA结合的特异性序列P2、间隔臂序列、3’端能与对应的支持探针的特异性序列P1互补配对的P3序列，所述支持延伸探针的特异性序列P2包括有：针对RRM1基因的选自SEQ.NO.6‑SEQ.NO.10中的2条或2条以上、和/或针对TYMS基因的选自SEQ.NO.11‑SEQ.NO.15中的2条或2条以上；以及针对B2M基因的选自SEQ.NO.16‑SEQ.NO.20中的2条或2条以上，针对TFRC基因的选自SEQ.NO.21‑SEQ.NO.25中的2条或2条以上，和针对TBP基因的选自SEQ.NO.26‑SEQ.NO.30中的2条或2条以上；(3)扩增延伸探针，每条扩增延伸探针包括有5’端能与目标基因mRNA结合的特异性序列P4、间隔臂序列、3’端序列P5，3’端还修饰有生物素；所述扩增延伸探针的特异性序列P4包括有：针对RRM1基因的选自SEQ.NO.31‑SEQ.NO.40中的5条或5条以上、和/或针对TYMS基因的选自SEQ.NO.41‑SEQ.NO.50中的5条或5条以上；以及针对B2M基因的选自SEQ.NO.51‑SEQ.NO.60中的5条或5条以上，针对TFRC基因的选自SEQ.NO.61‑SEQ.NO.70中的5条或5条以上，和针对TBP基因的选自SEQ.NO.71‑SEQ.NO.80中的5条或5条以上；所述P5为不存在发夹结构，探针内部和探针间不形成二聚体、不存在错配、与P1、P2、P3、P4和总mRNA之间均不存在非特异性结合的序列。