免疫毒素的表达和纯化方法

摘要

本发明一方面涉及一种在毒素抗性的突变型巴斯德毕赤酵母菌株中表达免疫毒素的方法，包括：a)在包含蛋白的酶消化产物和酵母提取物的生长培养基中培养巴斯德毕赤酵母，并保持溶解氧浓度在40％或以上；b)进行甲醇诱导，诱导过程中添加0.5-0.75ml/min/10L初始体积的限量甲醇，持续注入酵母提取物，温度在17.5℃以下，补充消泡剂至0.07％，搅拌减慢至400RPM，且诱导阶段延长至163小时。本发明另一方面涉及一种纯化非糖基化免疫毒素的方法，包括：a)将含有非糖基化免疫毒素的溶液加入疏水作用柱中；b)从疏水作用柱中获得含洗脱剂的第一非糖基化免疫毒素；c)将步骤(b)中获得的含洗脱剂的非糖基化免疫毒素加于阴离子交换柱上；d)通过使用硼酸钠溶液洗脱非糖基化免疫毒素，从阴离子交换柱中获得含洗脱剂的第二非糖基化免疫毒素；e)稀释步骤(d)中获得的含洗脱剂的第二非糖基化免疫毒素，使其中的硼酸钠浓度达到约50mM或更低；f)在阴离子交换柱上浓缩在步骤(e)中获得的含洗脱剂的稀释的非糖基化免疫毒素；g)从阴离子交换柱获得纯化的非糖基化免疫毒素。

主权项

一种在巴斯德毕赤酵母中表达免疫毒素的方法，包括：a)在包含蛋白的酶消化产物和酵母提取物的生长培养基中培养可表达免疫毒素的巴斯德毕赤酵母，其中所述免疫毒素包含白喉毒素部分；b)对巴斯德毕赤酵母进行甲醇诱导，其中甲醇诱导的温度在17.5℃以下，但不低于12℃；其中所述甲醇诱导是每10L初始培养基添加0.5至0.75ml/min的限量甲醇。