一种基于生物矿化原理的超微量蛋白质定量检测方法

摘要

本发明公开了一种基于纳米金微粒生物矿化原理的超微量蛋白质定量检测方法，该方法首先以第一代树状体(PPIHA)和氯金酸(HAuCl4)为原料，采用微波回流加热法制备表面氨基修饰的纳米金胶体，将制得的胶体在常温下与待测蛋白质结合形成偶联物，接着在柠檬酸钠-氯金酸体系中进行纳米金-蛋白偶联物的生物矿化，然后用荧光光谱光谱仪对生物矿化产物进行共振散射光谱分析。因产物共振散射光谱在特征波长处的峰值强度与蛋白质浓度呈线性关系，可对超微量蛋白质进行定量检测。本发明所建立的超微量蛋白质定量方法，简便快速，具有高灵敏、高特异性和准确度。本方法可移植性强，可用于肿瘤早期诊断、食品安全快速检测、水质监测等方面。

主权项

一种基于纳米金微粒生物矿化原理的超微量蛋白质定量检测方法，其特征在于，利用纳米金的共振散射光谱的变化进行检测，包含以下步骤：(1)表面氨基化的纳米金种子制备以树状体PPIHA和氯金酸HAuCl4为原料，使用微波回流加热法制备得到表面氨基化的纳米金种子溶胶，将1‑2mL，重量百分比为0.67％的氯金酸溶液溶解于100‑150mL超纯水中，加入85‑95μL，重量百分比为5％PPIHA的甲苯溶液；充分搅拌混合后，用微波回流加热3‑6min，制得表面氨基化的纳米金种子溶胶，4℃密封保存；(2)纳米金‑蛋白偶联物AuNPs‑BSA制备将180‑200μL，重量百分比为1％的牛血清白蛋白Bovine serum albumin，BSA溶液加入到3‑5mL步骤(1)制得的纳米金种子溶胶中，加入110‑130μL重量百分比为1％盐酸，摇匀后用超纯水稀释至6ml，制得AuNPs‑BSA偶联物；(3)AuNPs‑BSA偶联物的生物矿化取1‑2mL AuNPs‑BSA偶联物与0.6‑0.8mL pH为7.0磷酸盐缓冲液混合，摇匀，用超纯水稀释至10mL，备用；取0‑180μL上述AuNPs‑BSA偶联物，加入到3.00mL超纯水中，然后依次加入1‑2mL 0.02％氯金酸溶液，1‑3mL pH 2.26的柠檬酸钠‑磷酸盐缓冲液以及2‑3mL 8.0×10‑3mol/L的盐酸羟胺溶液NH2OH·HCL，再用超纯水稀释到8‑10mL，随后置于38℃孵育18‑23min，得到AuNPs‑BSA偶联物的生物矿化产物用于检测；(4)共振散射光谱工作曲线制备在0‑180μL范围内，间隔10μL，按照步骤(3)所述方法制得一系列不同浓度的AuNPs‑BSA偶联物的生物矿化产物；在200nm至800nm的光谱范围内测定产物的共振散射光谱，取特征峰的强度对BSA浓度做曲线，得到可检测0‑180μL BSA的工作曲线，此曲线可用于超微量蛋白质的定量检测；(5)测定实际样品方法按照步骤(2)，将180μL待测BSA溶液制得AuNPs‑BSA偶联物，依照步骤(4)得到其生物矿化产物，检测其共振散射光谱，在工作曲线上读出相应浓度。