抗草甘膦转基因大豆及其加工品快速检测试剂盒的制备和检测方法

摘要

本发明属于食品和饲料中转基因成分的检测技术，具体地说是用环介导等温扩增方法检测抗草甘膦转基因大豆及其加工品的试剂盒及方法。试剂盒包括环介导等温扩增反应液A、环介导等温扩增反应液B、Bst DNA聚合酶C、显色剂D、阳性对照DNA E；反应液A含有反应缓冲液、dNTP、硫酸镁、甜菜碱、上游内引物A：5′-AGGTGGCACCTACAAATGCCATCGGCAGAGGCATCTTGAAC-3′、下游内引物A：5′-TAGCTGGGCAATGGAATCCGAGGTCTCAGAAGACCAAAGGGC-3′、上游外引物A：5′-TCCATCTTTGGGACCACTGT-3′、下游外引物A：5′-CGACACTCTCGTCTACTCCA-3′；反应液B含有反应缓冲液、dNTP、硫酸镁、甜菜碱、上游内引物B：5’-AATCGAGCGGCGCCTCAGGCCGTAAGGAAGGCGACACC-3’、下游内引物B：5’-AATGCCGCCACGGGCTCGTCGCCGATGAAGGTG-3’、上游外引物B：5’-CCATGGGCGCCAGGAT-3’、下游外引物B：5’-ATCGGGCGCTTTGTGAG-3’。检测抗草甘膦转基因大豆及其加工品的方法包括样品DNA的提取、花椰菜花斑病毒CaMV 35S启动子和抗草甘磷CP4-EPSPS基因的环介导等温扩增、显色检测。其优点是快速、特异性强、灵敏度高、操作简便、重复性好、而且成本低。

主权项

一种抗草甘膦转基因大豆及其加工品快速检测试剂盒，其特征在于其中的试剂包括(1)‑(5)：(1)环介导等温扩增反应液A包括10×Bst buffer反应缓冲液、1‑2mmol/L dNTP、10‑15mmol/L硫酸镁、1‑1.5μmol/L上游内引物A、1‑1.5μmol/L下游内引物A、0.1‑0.4μmol/L上游外引物A、0.1‑0.4μmol/L下游外引物A和0.2‑0.6mol/L甜菜碱；其中10×Bst buffer反应缓冲液含有200mmol/L pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷‑盐酸、100mmol/L氯化钾、100mmol/L硫酸铵、20mmol/L硫酸镁和1％曲拉通X‑100；其中上游内引物A的序列为：5′‑AGGTGGCACCTACAAATGCCATCGGCAGAGGCATCTTGAAC‑3′；下游内引物A的序列为：5′‑TAGCTGGGCAATGGAATCCGAGGTCTCAGAAGACCAAAGGGC‑3′；上游外引物A  的序列为：5′‑TCCATCTTTGGGACCACTGT‑3′；下游外引物A的序列为：5′‑CGACACTCTCGTCTACTCCA‑3′；其中上游内引物A、下游内引物A、上游外引物A、下游外引物A体积比为：6∶6∶1∶1；(2)环介导等温扩增反应液B包括10×Bst buffer反应缓冲液、1‑2mmol/L dNTP、10‑15mmol/L硫酸镁、1‑1.5μmol/L上游内引物B、1‑1.5μmol/L下游内引物B、0.1‑0.4μmol/L上游外引物B、0.1‑0.4μmol/L下游外引物B和0.2‑0.6mol/L甜菜碱；其中10×Bst buffer反应缓冲液含有200mmol/L pH8.8的三羟基甲基氨基甲烷‑盐酸、100mmol/L氯化钾、100mmol/L硫酸铵、20mmol/L硫酸镁和1％曲拉通X‑100；其中上游内引物B的序列为：5’‑AATCGAGCGGCGCCTCAGGCCGTAAGGAAGGCGACACC‑3’；下游内引物B的序列为：5’‑AATGCCGCCACGGGCTCGTCGCCGATGAAGGTG‑3’；上游外引物B的序列为：5’‑CCATGGGCGCCAGGAT‑3’；下游外引物B的序列为：5’‑ATCGGGCGCTTTGTGAG‑3’；其中上游内引物B、下游内引物B、上游外引物B、下游外引物B体积比为：6∶6∶1∶1；(3)Bst DNA聚合酶C：8U/μL；(4)显色剂D：荧光染料PICO Green；(5)阳性对照DNAE。