发明名称 一种HIV重组亚型DNA疫苗的制备方法
摘要 本发明提供一种HIV重组亚型DNA疫苗的制备方法,通过以下步骤实现:设计与合成密码子优化后的融合基因序列,DNA疫苗的构建和体外表达能力测定。本发明以AE重组亚型HIV-1病毒为研究对象,构建包括env、pol、gag、tat、nef和rev基因在内的DNA疫苗,与AE-TRIVN相比,AE-Gp145TRN能够使特异性T细胞反应在Tat、Rev、Nef三个蛋白间更均匀的分布,提高了疫苗所活化的免疫反应广度。
申请公布号 CN102210874A 申请公布日期 2011.10.12
申请号 CN201110127617.6 申请日期 2011.05.17
申请人 浙江大学 发明人 杨益大;郑临;吕国才;谢珏;卢微;杨萍;王晓燕
分类号 A61K48/00(2006.01)I;A61K39/21(2006.01)I;C12N15/49(2006.01)I;A61P31/18(2006.01)I 主分类号 A61K48/00(2006.01)I
代理机构 杭州求是专利事务所有限公司 33200 代理人 张法高;赵杭丽
主权项 一种HIV重组亚型DNA疫苗的制备方法,其特征在于,通过以下步骤实现:(1) 设计与合成密码子优化后的融合基因序列,(2) DNA疫苗的构建和体外表达能力测定,A:重组质粒的酶切鉴定与测序:将构建的重组质粒AE‑Gp145TRN用BamHI和XbaI进行双酶切,酶切产物进行l%琼脂糖凝胶电泳,其中,Gp145TRN融合基因的片段长度为3423bp,载体片段长度为5071 bp,电泳结果显示:酶切结果与预期结果完全一致,DNA双向序列测定结果显示:插入序列与设计的序列完全一致;B:TRIVN融合蛋白真核表达:用LipofectamineTM 2000将空载体质粒与重组质粒AE‑Gp145TRN分别转染293T细胞,培养48 h后收集细胞,并制备蛋白样品进行Western‑Blot验证,在各泳道上样量基本相当的情况下,Western‑Blot结果显示,重组质粒转染产物中出现约190KDa的特异性条带,与预期大小一致。
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