酵母展示脂肪酶催化合成十二烯基琥珀酸淀粉酯的方法

摘要

本发明公开了一种酵母表面展示脂肪酶催化合成十二烯基琥珀酸淀粉酯的方法，包括：将谷物淀粉溶于水，吸涨后加入十二烯基琥珀酸酐乙醇溶液和酵母表面展示脂肪酶，在55～65℃下搅拌反应1～1.5小时，分离、纯化制得十二烯基琥珀酸淀粉酯。所述的酵母表面展示脂肪酶制备方法为：将线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母表面展示脂肪酶。本发明通过将脂肪酶展现在细胞外，利用该酶制剂催化合成十二烯基琥珀酸淀粉酯，不仅提高了转化效率，而且缩短了反应时间，降低了生产成本。

主权项

一种酵母表面展示脂肪酶催化合成十二烯基琥珀酸淀粉酯的方法，包括：将谷物淀粉溶于水，吸涨后加入体积浓度10～20％的十二烯基琥珀酸酐乙醇溶液和酵母表面展示脂肪酶，在55～65℃下搅拌反应1～1.5小时，分离、纯化制得十二烯基琥珀酸淀粉酯；所述的酵母表面展示脂肪酶通过如下方法制备：将经线性化处理的重组质粒转入毕赤酵母(Pichia pastoris)GS115，将所得转化子接种于BMMY培养基中，诱导培养72～144小时后离心收集菌体，菌体经冲洗、生物印迹和冷冻干燥制得酵母表面展示脂肪酶；所述的重组质粒由原始载体pPIC9K和依次插入原始载体pPIC9K中MFα1信号肽下游的脂肪酶基因和毕赤酵母GS115的细胞壁α凝集素基因组成。