一种流式细胞电融合仪

摘要

一种流式细胞电融合仪包括：细胞一对一融合部分、融合细胞检出分选部分和单细胞收集部分；细胞一对一融合部分上设有多对平行的细胞定位通道，通道末端可吸附不同的细胞，在电流作用下两种细胞可靠近并发生融合。融合后细胞经放置质膜完全融合后，进入融合细胞检出分选部分，融合细胞检出分选部分主要由激光光源、荧光检测器和偏转板构成，发生融合的细胞既红绿荧光双染的细胞被收集到收集管，每收集一个细胞，检测器液滴将停止流动，安装于收集管上部的细胞培养液贮存器向收集管加入200μl细胞培养液，200μl细胞培养液使收集管末端打开，液体进入下方96孔板的一个孔中。此时，流动室液体继续开启，将下一个融合细胞放入96孔板下一孔中。本发明可一次性连续完成细胞一对一电融合，融合后融合子可正确检出并将每个融合子分别培养。

主权项

一种流式细胞电融合仪，其特征在于包括：细胞一对一融合部分、融合细胞检出分选部分和单细胞收集部分；所述细胞一对一融合部分(1)包括细胞融合室(2)、多对平行的细胞定位通道(3)和细胞吸取通道(4)，在细胞电融合芯片(1)中间设有中空密闭的细胞融合室(2)，细胞融合室(2)两端分别为第一细胞加样孔(6)和第二细胞加样孔(7)；细胞融合室(2)两侧底部分布有多对平行的细胞定位通道(3)，每个细胞定位通道(3)与细胞吸取通道(4)连通，细胞吸取通道(4)逐级连通放大至末端开口延至上下两端的第一细胞吸取口(5)和第二细胞吸取口(8)；第一细胞加样孔(6)和第二细胞加样孔(7)及第一细胞吸取口(5)和第二细胞吸取口(8)分别通过软管与两种不同的细胞液连接，第一细胞吸取口(5)和第二细胞吸取口(8)分别与注射泵或电极连接；在注射泵的吸取作用下从第一细胞加样孔(6)和第二细胞加样孔(7)进入的细胞液向细胞融合室(2)流入，在一侧每个细胞定位通道(3)处吸取一个细胞；另一侧的细胞定位通道(3)吸取另一种细胞，细胞吸取完毕后，分别在细胞吸取通道(4)末端的第一细胞吸取口(5)和第二细胞吸取口(8)的电极加电，使细胞发生一对一的电融合，细胞融合后的混合细胞液被直接泵入流式细胞分选部分；所述融合细胞检出分选部分包括样品管(9)、鞘液罐(10)、喷嘴(12)、激光器(13)、荧光检测器(14)、分光器(15)、集光器(16)、正电荷偏转板(17)、负电荷偏转板(18)、收集器(19)、补液口(26)、计算机(24)、流速调节泵(25)和液滴充电器(21)；所述单细胞收集部分由培养板定位装置(23)和位于培养板定位装置(23)上的96孔板(22)组成；融合后的混合细胞液被泵入样品管(9)中，与鞘液罐(10)中的鞘液混合后进入照射室(11)，照射后从喷嘴(12)处喷出，由流速调节泵(25)调节流速；激光器(13)发出激发光使细胞中荧光染料激发出发射光，发射光由集光器(16)收集，被分光器(15)分成红绿荧光，然后由光检测器(14)收集，收集得到的细胞信号由计算机(24)进行放大、模数转换处理后传送到液滴充电器(21)中被充电；带电液滴携带细胞通过正电荷偏转板(17)、负电荷偏转板(18)而发生偏转，有两种荧光的细胞落入收集器(19)中，此时位于收集器(19)上端的补液口(26)将细胞培养液补充到收集器(19)中，并同时落入收集器(19)下方的96孔板(22)中，之后调整培养板定位装置(23)，使下一个孔对准细胞收集器(19)，进行下一个融合子的收集。