一株兼性厌氧海洋红假单胞菌的活性提取物及其制法和用途

摘要

本发明属于生物领域，涉及一株兼性厌氧海洋红假单胞菌、该菌株培养物的活性提取物及其制法，以及该提取物在抗菌药物方面的应用价值。一株从渤海分离获得的海洋菌株PSB-02，鉴定为红假单胞菌Rhodopseudomonassp.，其乙酸乙酯提取相和正丁醇提取相经硅胶薄层层析和反相高效液相分离，得到三个有效部分的油状物，对荧光假单胞菌、铜绿假单胞菌、表皮葡萄球菌和枯草芽孢杆菌有抗性，具有作为抗菌药物的潜在用途。

主权项

一株兼性厌氧海洋红假单胞菌PSB‑02 CGMCC No.2730培养液的活性提取物；是以如下方法制得的：A.种子培养：将液体培养基灌装到血清瓶中，瓶中留2cm高的空隙，血清瓶盖微旋紧以利透气，于高压消毒器中121℃、0.105Mpa灭菌20min；冷却后接种海洋细菌PSB‑02菌株，并用无菌培养基补满，瓶盖旋紧不透气；将血清瓶于28～30℃下恒温光照培养，采用白炽灯作光源，功率为15W～40W为宜，光源距离培养容器20厘米～30厘米，两侧安置，培养时间为7～10天；B.扩大培养：按体积比5‑10％的种子培养液接种，利用密封培养容器，采取类同种子培养的过程大量培养PSB‑02菌株菌液，于28～30℃恒温培养20～25天；所述种子培养和扩大培养中，液体培养基为：蛋白胨                   2.5g；酵母膏                   2.5g；人工海水或陈海水         1000ml；调节pH为6.8‑7.0；人工海水配方：NaCl                     25.0g；Na2SO4                   4.0g；KCl                      0.7g；NaHCO3                   0.20g；KBr                      0.10g；H3BO3                    0.03g；NaF                      0.003g；1.0mol/L MgCl2溶液       53mL；1.0mol/1CaCl2溶液        10mL；0.1mol/L SrO2溶液        0.90ml；蒸馏水1000ml，调节pH为6.8‑7.0；C.提取：将完成扩大培养过程的菌液用旋转蒸发仪于50℃减压浓缩至原体积的十分之一，浓缩液过滤，滤液用等体积的乙酸乙酯连续抽提3次，抽提后的水相再用等体积的正丁醇连续抽提3次，提取液分别用旋转蒸发仪于50℃减压蒸干，得两份干固体；D.提纯：将以上两份干固体分别滴加少量甲醇溶解，点样于分析型硅胶薄层板上，分别选用体积比为二氯甲烷∶甲醇＝10∶1的展开剂展开，采用薄层层析生物自显影活性测试法追踪活性斑点；再将样品分别点样于制备型硅胶薄层板，用上述展开剂展开，将活性条带刮下，分别用体积比为二氯甲烷∶甲醇＝2∶1的混合溶剂洗脱；洗脱相蒸干后通过HPLC进一步纯化，使用C18反相柱，用体积浓度为5～100％的甲醇水作为流动相，进行30分钟梯度洗脱，再用100％甲醇洗脱20分钟，检测254nm紫外吸收，通过逐步活性追踪，制备出活性峰组分，将含活性组分的洗脱液用旋转蒸发仪减压蒸干，得三份油状物。